兔支气管成纤维细胞

兔支气管成纤维细胞

采用组织块贴壁法从新西兰大白兔的支气管成纤维细胞来源组织中分离成纤维细胞，经 0.25% 胰蛋白酶消化传代后，接种于未包被培养皿中，使用 DMEM 低糖培养基（含 10% FBS、100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素）培养；通过免疫荧光染色检测成纤维细胞标志物 CD90（Thy-1）、CD44、vimentin 及 FSP-1 表达，结合细胞形态学观察（梭形、长突起 morphology）和碱性磷酸酶（ALP）活性检测确认细胞身份。

产品名称：兔支气管成纤维细胞

英文名称： Rabbit Bronchial Fibroblasts

组织来源： 支气管组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔支气管成纤维细胞采用胶原酶-胰酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的兔支气管成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  兔支气管成纤维细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔支气管成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

1. 细胞复苏：取出冻存兔支气管成纤维细胞冻存管，置于 37℃水浴快速融化冻存液，剩余微小冰晶取出冻存管，酒精擦拭管壁消毒，移入安全柜，将细胞悬液缓慢转移至含有完全培养基的离心管。

2. 离心去除冻存保护液：离心管配平，1000rpm 离心 5min，离心完成，吸弃上层冻存上清液，保留管底完整细胞沉淀。

3. 重悬离散细胞沉淀：加入预热兔支气管成纤维细胞完全培养基，轻柔反复吹打管底沉淀，打散细胞聚集体，制备均匀单细胞悬液。

4. 计数接种铺瓶：活细胞计数，按照推荐接种密度接种细胞培养瓶，接种完毕十字晃动培养瓶，使细胞均匀铺展瓶底，防止局部高密度堆积。

5. 培养箱静置贴壁孵育：将培养瓶平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度细胞培养箱，静置孵育 24h，不随意移动培养瓶，保障细胞贴壁伸展。

6. 首次换液清除死细胞碎片：孵育 24h 后镜检细胞贴壁，弃除旧培养基，去除悬浮死亡细胞，补入预热新鲜完全培养基放回培养箱。

7. 常规培养传代使用：每 2‑3 天更换新鲜培养基，观察梭形成纤维细胞形态，细胞汇合 80‑85%，进行胰酶消化传代，用于气道纤维化相关体外实验。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。