兔真皮成纤维细胞

兔真皮成纤维细胞

运用胶原酶 I 消化法从新西兰大白兔真皮成纤维细胞组织中提取间充质成分，经密度梯度离心去除血液细胞后，接种于胶原 IV 包被的培养表面，使用含 10% FBS 的 DMEM/F12 培养基培养；通过流式细胞术分析 CD90+、CD44+、CD105+ 阳性率及 CD34-、CD45- 阴性率，免疫荧光染色显示 vimentin 强阳性、角蛋白阴性，并经成纤维细胞集落形成实验验证增殖能力。

产品名称：兔真皮成纤维细胞

英文名称： Rabbit Dermal Fibroblasts

组织来源： 皮肤组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔真皮成纤维细胞采用先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的兔真皮成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  兔真皮成纤维细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔真皮成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

1. 细胞复苏：取出冻存兔真皮成纤维细胞冻存管，投入 37℃水浴快速融化，残留微小冰晶即刻取出，75% 酒精擦拭管壁，移入生物安全柜，将细胞悬液缓慢滴入装有完全培养基的无菌离心管稀释冻存液。

2. 离心去除冻存保护剂：离心管配平，1000rpm 离心 5min，离心结束后，缓慢吸弃上层全部上清液，保留管底完整细胞沉淀。

3. 重悬制备单细胞悬液：加入预热兔真皮成纤维细胞完全培养基，轻柔吹打管底沉淀，充分打散细胞团聚物，得到分散均匀的单细胞悬液。

4. 计数接种铺瓶：对悬液开展活细胞计数，按照推荐接种密度接种细胞培养瓶，接种结束后十字方向晃动培养瓶，使细胞均匀铺在瓶底。

5. 培养箱静置贴壁生长：将培养瓶放入 37℃、5% CO₂饱和湿度细胞培养箱，静置孵育 24h，期间禁止挪动培养瓶，给成纤维细胞充足贴壁伸展时间。

6. 首次换液清除死细胞：孵育 24h 后取出，倒置显微镜观察贴壁情况，吸弃旧培养基，去除悬浮死亡细胞和碎片，补入预热新鲜完全培养基放回培养箱。

7. 常规培养传代应用：每 2‑3 天更换新鲜完全培养基，观察梭形成纤维细胞形态，细胞汇合达到 80‑85%，即可胰酶消化传代，用于皮肤修复相关体外实验。

1.取材过程需严格无菌操作，组织块用PBS冲洗3次以上以去除血液残留，减少培养污染风险。

2.培养皿经常规消毒处理即可使用，成纤维细胞对培养表面要求不高，贴壁速度快。

3.成纤维细胞生长旺盛，贴壁后24小时即可见细胞迁出，约7-10天可首次传代。

4.培养基中补充10%FBS和1%青霉素-链霉素，必要时可添加1ng/ml EGF促进细胞增殖。

5.换液时每2-3天更换一次新鲜培养基，成纤维细胞代谢旺盛需及时补充营养和清除代谢产物。