产品名称 | 兔羊膜上皮细胞 | 组织来源 | 胎盘组织 |
英文名称 | Rabbit Amniotic Epithelial Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2851 |
方法简介 实验室分离的兔羊膜上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔羊膜上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔羊膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔羊膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠可溶性胰岛素受体(sIR)elisa试剂盒 | KMS-27多发性骨髓瘤 |
大鼠白介素2可溶性受体α链(sIL-2Rα；CD25)elisa试剂盒 | 小鼠眼外肌成纤维细胞 |
大鼠可溶性白介素1受体1(sIL-1R1)elisa试剂盒 | 小鼠嗅球神经干细胞 |
大鼠分泌型免疫球蛋白E(sIgE)elisa试剂盒 | 兔角膜内皮细胞 |
大鼠α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)elisa试剂盒 | 小鼠脑神经瘤细胞带荧光素酶Neuro-2a+LUC(种属鉴定) |
大鼠α-球蛋白(α-GLB)elisa试剂盒 | 人附睾平滑肌细胞 |
猪硫酸乙酰肝素（HS）elisa试剂盒 | 兔原代肝间质细胞 |
smmc-7721人肝癌细胞专用培养基 | TRIM42基因过表达细胞株 |
RT112人膀胱癌细胞专用培养基 | AFG2B基因过表达细胞株 |
兔原代杏仁核神经元细胞专用培养基 | MPO基因过表达细胞株 |
人原代子宫内膜基质细胞专用培养基 | CASD1基因过表达细胞株 |
人原代肾小管上皮细胞专用培养基 | NAALAD2基因过表达细胞株 |
兔羊膜上皮细胞SK-NEP-1细胞专用培养基 | CATSPER4基因过表达细胞株 |
人原代肠系膜动脉平滑肌细胞专用培养基 | GPR21基因过表达细胞株 |
1. 细胞复苏：取出冻存兔羊膜上皮细胞冻存管，37℃水浴快速融化冻存样本，残余少量冰晶就取出冻存管，酒精消毒管壁，安全柜中将细胞悬液缓慢加入含上皮细胞完全培养基的离心管稀释。
2. 离心去除冻存保护剂：离心管配平，1000rpm 离心 5min，离心结束，小心吸除上清冻存液，上皮细胞沉淀松散，吸上清时靠近液面，不要触碰底部沉淀。
3. 温和重悬细胞沉淀：加入预热兔羊膜上皮细胞专用完全培养基，轻柔吹打沉淀，打散细胞团，制备单细胞悬液，上皮细胞对机械剪切敏感，吹打动作放缓。
4. 计数接种铺板：进行活细胞计数，按照上皮细胞适宜接种密度接种培养瓶，接种完成后十字晃动培养瓶，使细胞均匀分布培养底面。
5. 培养箱静置贴壁：将培养瓶平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，静置孵育 24h，不移动培养器皿，保障上皮细胞完成贴壁。
6. 初次换液去除悬浮碎片：孵育 24h 后镜检，弃旧培养基，去除悬浮死细胞，添加预热新鲜完全培养基，放回培养箱继续扩增。
7. 维持培养与传代：后续每 2‑3 天更换培养基，观察多边形上皮细胞形态，细胞汇合度达到 80%‑85%，进行胰酶消化传代，用于上皮功能相关体外实验。
