产品名称 | 兔羊膜间质细胞 | 组织来源 | 胎盘组织 |
英文名称 | Rabbit Amniotic Mesenchymal Stromal Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2855 |
方法简介 实验室分离的兔羊膜间质细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔羊膜间质细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 兔羊膜间质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔羊膜间质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，取材需严格无菌操作
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、MSC专用培养基/干细胞专用培养基、FBS、beta-巯基乙醇、L-谷氨酰胺
分离纯化步骤
从实验动物目标组织(骨髓/脂肪/脐带/牙髓等)中分离间充质成分
组织剪碎后经胶原酶消化(37度、2小时)，过滤获取单细胞悬液
采用密度梯度离心(Ficoll)纯化单个核细胞层
将细胞接种于培养皿中，间充质干细胞24-48小时贴壁，非贴壁细胞换液去除
贴壁细胞扩大培养至60-70%融合后，流式分选CD90+/CD105+/CD34-/CD45-细胞
原代培养要点
干细胞培养需使用专用培养基(含20%FBS的MSC培养基或DMEM/F12+20%FBS)
接种密度建议5x10^3-1x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，间充质干细胞呈梭形贴壁生长，融合达80%时传代
干细胞具有三系分化潜能，可在诱导培养基中向成骨/成脂/成软骨方向分化
常见问题优化
干细胞增殖缓慢：添加FGF-2(10ng/mL)和EGF(10ng/mL)可促进增殖
干细胞分化潜能下降：控制传代次数在3-5代以内，避免过度扩增
细胞纯度不高：采用流式分选CD90+/CD105+双阳性标记可提高纯度
大鼠沉默调节蛋白1(SIRT1)elisa试剂盒 | KHM-1B多发性骨髓瘤 |
大鼠表面免疫原性蛋白(SIP)elisa试剂盒 | 小鼠结膜囊成纤维细胞 |
大鼠白介素2可溶性受体α链(sIL-2Rα；CD25)elisa试剂盒 | 小鼠脊髓星形胶质细胞 |
大鼠分泌型免疫球蛋白M(sIgM)elisa试剂盒 | 产品：鸡卵泡颗粒细胞 |
大鼠α平滑肌肌动蛋白抗体(αSMA-Ab)elisa试剂盒 | 人结肠癌细胞SW620 (STR鉴定正确) |
大鼠α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)elisa试剂盒 | 大鼠DC细胞 |
猪硫氧还蛋白还原酶（TrxR）elisa试剂盒 | 兔原代肾间质成纤维细胞 |
SK-OV-3+LUC人卵巢癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | CEACAM20基因过表达细胞株 |
RKO人结肠腺癌细胞专用培养基 | FBXO33基因过表达细胞株 |
人原代皮脂腺癌细胞专用培养基 | DCLK3基因过表达细胞株 |
小鼠原代胸腺基质细胞专用培养基 | FAM118B基因过表达细胞株 |
人原代肾小球系膜细胞专用培养基 | EVI5L基因过表达细胞株 |
兔羊膜间质细胞SK-N-BE(2)细胞专用培养基 | GAL3ST1基因过表达细胞株 |
大鼠原代肌腱细胞专用培养基 | ZNF711基因过表达细胞株 |
1. 细胞复苏：取出冻存兔羊膜间质细胞冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，留有少量冰晶时取出，酒精擦拭管壁，安全柜中将细胞悬液缓慢加入装有完全培养基的离心管，稀释冻存保护剂。
2. 离心去除冷冻保护剂：配平离心管，1000rpm 离心 5min，离心完成，小心吸除全部上清液，保留管底细胞沉淀，切勿扰动沉淀。
3. 重悬离散细胞沉淀：加入预温兔羊膜间质细胞专用完全培养基，反复轻柔吹打沉淀，打散细胞聚集体，获得均一的单细胞悬液，吹打力度温和，减少细胞凋亡损伤。
4. 计数接种铺瓶：对悬液进行活细胞计数，按照标准接种密度接种细胞培养瓶，接种完成后采用十字摇晃法混匀细胞，使细胞均匀分布培养底面。
5. 培养箱孵育贴壁：将培养瓶平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，静置培养 24h，不挪动培养瓶，给予间质细胞充足贴壁时间。
6. 初次换液去除悬浮杂质：24h 后镜检细胞贴壁状态，弃去旧培养基，清除悬浮死亡细胞，添加预热新鲜完全培养基，放回培养箱继续扩增培养。
7. 维持培养及传代：后续每 2‑3 天更换培养基，观察细胞间质样形态，细胞汇合度达到 80%‑85%，开展胰酶消化传代，或者用于组织修复相关体外实验。
