兔血管外膜成纤维细胞

兔血管外膜成纤维细胞

采用组织块贴壁法从新西兰大白兔的血管外膜成纤维细胞来源组织中分离成纤维细胞，经 0.25% 胰蛋白酶消化传代后，接种于未包被培养皿中，使用 DMEM 低糖培养基（含 10% FBS、100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素）培养；通过免疫荧光染色检测成纤维细胞标志物 CD90（Thy-1）、CD44、vimentin 及 FSP-1 表达，结合细胞形态学观察（梭形、长突起 morphology）和碱性磷酸酶（ALP）活性检测确认细胞身份。

产品名称：兔血管外膜成纤维细胞

英文名称： Rabbit Vascular Adventitial Fibroblasts

组织来源： 血管组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔血管外膜成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的兔血管外膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  兔血管外膜成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔血管外膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

步骤一：血管外膜组织无菌取材 无菌摘取兔新鲜血管组织，预冷无菌PBS反复冲洗干净血迹与杂质，精准剥离血管外膜结缔组织，剔除血管内膜、中膜及脂肪杂质，将纯净外膜组织修剪为1mm³细小组织碎块，全程低温无菌操作。

步骤二：组织块贴壁预处理 将外膜组织碎块均匀平铺于无菌培养瓶底，保持间距均匀，倒置培养瓶静置30分钟，使组织块紧密贴附瓶壁，防止后续加液冲散，为成纤维细胞爬出奠定基础。

步骤三：加液活化静置培养 缓慢翻转培养瓶，加入预热的血管外膜成纤维细胞专用完全培养基，完全浸没组织碎块，放入37℃、5%CO₂培养箱静置培养48小时，全程静置不移动，促进细胞从组织块周边增殖爬出。

步骤四：换液除杂纯化细胞 48小时后首次更换新鲜培养基，吸出旧培养基，去除漂浮组织残渣、死细胞与杂细胞，补充等量新鲜培养基，持续纯化目标成纤维细胞。

步骤五：细胞消化制备悬液 待细胞融合度达到80%时，弃旧培养基，无菌PBS洗涤瓶底2次，加入0.125%胰蛋白酶温和消化2分钟，细胞回缩变圆后立即加完全培养基终止消化，轻柔吹打制备均匀单细胞悬液。

步骤六：计数校准与接种传代 取样计数活细胞数量，调整细胞悬液浓度至6×10⁵个/mL，按1:2比例传代接种至新无菌培养瓶，轻轻晃动均匀铺板，标注传代时间与细胞信息。

步骤七：恒温增殖养护与监测 放回恒温培养箱静置培养24小时，细胞贴壁稳固后常规每48小时换液一次。每日观察成纤维细胞梭形形态、增殖速度与融合状态，及时排查污染、细胞老化等异常问题，维持细胞稳定生长。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.培养皿经常规消毒处理即可使用，成纤维细胞对培养表面要求不高，贴壁速度快。

3.成纤维细胞体外增殖能力强，传代比例1:3至1:5，细胞融合达80-90%时需及时传代防止过度融合。

4.培养基中需添加20ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)以维持细胞增殖活性。

5.培养期间注意观察是否有成纤维细胞过度生长压制其他细胞类型的情况，必要时使用选择性培养基。