产品名称 | 兔嗅球神经元细胞 | 组织来源 | 嗅球组织 |
英文名称 | Rabbit Olfactory Bulb Neurons | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3749 |
方法简介 实验室分离的兔嗅球神经元细胞采用胰蛋白酶消化法、神经元专用培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来。
质量检测 实验室分离的兔嗅球神经元细胞经β-Tubulin-Ⅲ免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 兔嗅球神经元细胞完全培养基(基础培养基，含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 神经元细胞样
传代比例： 不传代
传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液： 0.125%胰蛋白酶
兔嗅球神经元细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，需快速取材以保证神经元活力
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、Neurobasal培养基、B27添加剂、NGF、BDNF、NT-3、聚赖氨酸、脑基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标脑区/脊髓/神经组织，用预冷无钙镁PBS仔细冲洗
在显微镜下仔细分离目标区域，去除血管和膜组织，剪碎至1mm3
用0.25%胰蛋白酶在37度消化15-20分钟，加入DNase I辅助消化
用含FBS的DMEM终止消化，移液器轻柔吹打制成单细胞悬液
经40um滤网过滤后，300g离心5分钟收集神经元细胞
原代培养要点
将神经元细胞接种于聚赖氨酸包被的盖玻片或培养皿中，使用Neurobasal+B27培养基
接种密度建议1-2x10^5 cells/cm2，37度、5% CO2、95%湿度培养
神经元培养需添加NGF(10ng/mL)、BDNF(10ng/mL)等神经营养因子
7-14天后可观察到明显的神经元突起生长，21天后形成神经网络
常见问题优化
神经元存活率低：培养基中添加GlutaMAX和丙酮酸钠可提高神经元存活率
胶质细胞过度生长：使用Ara-C(10uM)处理可抑制胶质细胞增殖
神经元突起生长不良：添加NGF、BDNF等神经营养因子，使用脑基质胶包被基底
大鼠沉默调节蛋白3(SIRT3)elisa试剂盒 | RMC-1大鼠视网膜muller细胞 |
大鼠去乙酰化酶Sirtuin-2(SIRT2)elisa试剂盒 | 小鼠杏仁核神经元细胞 |
大鼠去乙酰化酶(SIRT1)elisa试剂盒 | 小鼠脊髓微血管内皮细胞 |
大鼠可溶性白介素6受体(sIL-6R)elisa试剂盒 | INS-1 (大鼠胰岛细胞瘤细胞) (种属鉴定正确) |
大鼠α谷胱甘肽S转移酶(α-GST)elisa试剂盒 | 人乳腺导管癌细胞BT474(STR鉴定正确) |
大鼠α肌动蛋白(α Actin)elisa试剂盒 | 兔雪旺细胞 |
猪卵黄蛋白羧肽酶（CPVL）elisa试剂盒 | 大鼠原代卵巢内膜细胞 |
SK-N-SH人神经母瘤细胞专用培养基 | CDC14A基因过表达细胞株 |
RL95-2人子宫内膜癌细胞专用培养基 | BAG4基因过表达细胞株 |
人原代子宫内膜间质细胞专用培养基 | CAPN8基因过表达细胞株 |
兔原代视网膜前体细胞专用培养基 | DLL1基因过表达细胞株 |
人原代食管成纤维细胞专用培养基 | ZMYND15基因过表达细胞株 |
兔嗅球神经元细胞SK-MEL-2细胞专用培养基 | NLGN4X基因过表达细胞株 |
兔原代甲状旁腺细胞专用培养基 | DMRTA1基因过表达细胞株 |
步骤一：嗅球组织无菌低温取材 无菌低温环境下快速摘取兔脑部新鲜嗅球组织，立即放入预冷无菌基础培养基中，轻柔冲洗表面血迹与杂质，精准剔除脑膜、血管及无关脑组织，保留纯净嗅球神经组织，修剪为细小组织碎块，全程低温操作防止神经元凋亡。
步骤二：温和酶解解离神经细胞 加入预热的0.2%胰蛋白酶消化液，完全浸没嗅球组织碎块，37℃水浴避光消化9分钟，每隔3分钟轻柔摇晃一次，温和解离神经元细胞，避免过度消化损伤神经突触结构。
步骤三：终止消化与过滤收集 消化达标后立即加入含血清神经元专用培养基终止消化，轻柔缓慢吹打混合液，使神经元细胞充分分散，过滤去除组织残渣，收集纯净嗅球神经元细胞悬液。
步骤四：离心洗涤纯化细胞 1000rpm低速离心5分钟，弃上清去除消化液与杂质，保留细胞沉淀。无菌PBS轻柔重悬洗涤2次，彻底清除残留污染物，保护脆弱神经元活性。
步骤五：低密度计数与浓度校准 专用培养基重悬细胞制备单细胞悬液，台盼蓝染色计数活细胞，根据嗅球神经元低密度生长特性，将细胞浓度精准调整至4×10⁵个/mL，保障突触正常分化生长。
步骤六：包被培养板接种铺板 将细胞悬液接种至多聚赖氨酸包被的无菌培养板中，轻轻晃动均匀铺板，为神经元贴壁、突触伸展提供良好基质环境，标注实验信息。
步骤七：避光静置分化培养 放入37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱避光静置培养48小时，全程禁止晃动。48小时后首次半量换液，后续每3天半量换液，每日观察神经元形态、突触延伸与网络形成状态。
