产品名称 | 兔小气道平滑肌细胞 | 组织来源 | 小气道组织 |
英文名称 | Rabbit Small Airway Smooth Muscle Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3818 |
方法简介 实验室分离的兔小气道平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的兔小气道平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 兔小气道平滑肌细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔小气道平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，组织取材需保持血管/器官完整性
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、平滑肌细胞专用培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织(血管/器官平滑肌层)，用预冷PBS反复冲洗去除血液
仔细分离去除外膜和黏膜层，仅保留平滑肌层组织，剪碎至1-2mm3
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合液，37度消化40-60分钟，期间振荡2-3次
消化完成后过滤(70um+40um)，300g离心10分钟收集细胞沉淀
细胞悬液接种于培养皿中，采用差速贴壁法24小时后换液去除非贴壁细胞
原代培养要点
平滑肌细胞贴壁能力较强，接种后24-48小时可见贴壁细胞呈梭形生长
使用含20%FBS的DMEM/F12完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时进行传代
平滑肌细胞传代时使用0.25%胰蛋白酶消化5-10分钟，离心收集后重新接种
常见问题优化
细胞纯度不高：可采用药物筛选法(5-氟尿嘧啶20uM处理48小时去除非平滑肌细胞)
平滑肌细胞表型转换：控制传代次数在5代以内，培养基中保持适当FBS浓度(10-20%)
细胞生长缓慢：添加10ng/mL PDGF-BB可促进平滑肌细胞增殖
大鼠分泌型Klotho 蛋白(s-Klotho)elisa试剂盒 | HI9-7/IGF-IR大鼠脑海马体成纤维细胞 |
大鼠血钾(SK)elisa试剂盒 | 小鼠神经胶质细胞 |
大鼠沉默调节蛋白3(SIRT3)elisa试剂盒 | 小鼠股骨头微血管内皮细胞 |
大鼠去乙酰化酶Sirtuin-2(SIRT2)elisa试剂盒 | HSC-T6 (大鼠肝星形细胞) (种属鉴定正确) |
大鼠α淀粉酶(α-AMS)elisa试剂盒 | 人二倍体细胞/人胚肺成纤维细胞2BS (STR鉴定正确) |
大鼠α-分泌酶(α-Secretase)elisa试剂盒 | 人脂肪血管基质细胞 |
猪卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）elisa试剂盒 | 小鼠原代脑皮层神经元细胞 |
SK-NEP-1人肾母瘤细胞专用培养基 | LPO基因过表达细胞株 |
RD人横纹肌肉瘤细胞专用培养基 | MPO基因过表达细胞株 |
兔原代股动脉内皮细胞专用培养基 | DIPK1B基因过表达细胞株 |
猪原代前列腺成纤维细胞专用培养基 | MYORG基因过表达细胞株 |
人原代视网膜色素上皮细胞专用培养基 | CATSPER4基因过表达细胞株 |
兔小气道平滑肌细胞SK-LU-1细胞专用培养基 | ZNF711基因过表达细胞株 |
兔原代支气管上皮细胞专用培养基 | ZNF560基因过表达细胞株 |
步骤一：气道组织无菌取材修剪 无菌条件下摘取兔肺组织末端小气道组织，放入预冷无菌PBS中反复冲洗，清除气道分泌物、淤血与杂质，剔除肺实质、血管及结缔组织，分离纯净小气道管壁平滑肌组织，修剪为细小组织碎块，全程低温无菌保护细胞活性。
步骤二：气道平滑肌组织消化 加入预热的0.2%胶原酶消化液，完全浸没小气道平滑肌组织碎块，37℃水浴恒温消化18分钟，每隔6分钟轻柔摇晃一次，充分解离平滑肌细胞与气道基质组织。
步骤三：终止消化与细胞收集 消化完成后加入含血清完全培养基终止酶活性，轻柔反复吹打组织混合液，使平滑肌细胞充分脱落分散，过滤去除未消化组织残渣，收集纯净细胞悬液。
步骤四：离心洗涤纯化细胞 细胞悬液1100rpm离心6分钟，弃上清杂质液，保留细胞沉淀。无菌预热PBS重悬洗涤2次，彻底清除消化液残留、组织碎片，获得高纯度小气道平滑肌细胞。
步骤五：活细胞计数与浓度调整 专用完全培养基重悬细胞，制备均匀单细胞悬液，台盼蓝染色筛选活细胞，精准计数后将细胞浓度调整至6×10⁵个/mL，适配小气道平滑肌细胞贴壁增殖特性。
步骤六：规范接种均匀铺板 将细胞悬液接种至无菌培养瓶中，轻轻十字晃动培养瓶，使细胞均匀分布贴壁，避免局部堆积，清晰标注细胞批次、接种时间与培养条件。
步骤七：恒温培养与周期养护 放入37℃、5%CO₂培养箱静置培养24小时，细胞贴壁稳固后更换新鲜培养基，后续每48小时换液一次。每日观察细胞梭形形态、增殖融合状态，及时排查污染与细胞异常凋亡问题。
