产品名称 | 兔小肠血管内皮细胞 | 组织来源 | 小肠组织 |
英文名称 | Rabbit Small Intestinal Vascular Endothelial Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3796 |
方法简介 实验室分离的兔小肠血管内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔小肠血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）
培养基： 兔小肠血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔小肠血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，每只可获得2-5x10^5个内皮细胞，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、兔抗细胞CD31抗体(用于流式分选)、ECM基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标血管/组织，用预冷PBS冲洗去除血液，仔细分离去除外膜和脂肪组织
将组织剪碎后加入0.25%胰蛋白酶，37度消化15-20分钟，收集消化液
再加入II型胶原酶，37度振荡消化45-60分钟，充分分散组织
消化液经70um和40um滤网依次过滤，300g离心10分钟收集细胞
用含CD31抗体的磁珠进行阳性/阴性分选，或采用差速贴壁法去除成纤维细胞，收集CD31+内皮细胞
原代培养要点
将纯化后的内皮细胞接种于明胶预包被的培养皿中，使用ECM基质胶包被可显著提高贴壁率
接种密度建议3x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养，内皮细胞通常24-72小时贴壁
使用内皮细胞专用培养基(含20%FBS、EGF 5ng/mL、FGF 2ng/mL、肝素10ug/mL)
每2-3天换液一次，细胞融合至80-90%时可用0.05%胰蛋白酶-EDTA传代
常见问题优化
内皮细胞被成纤维细胞污染：采用差速贴壁法2-3次，或CD31磁珠分选提高纯度
内皮细胞凋亡：培养基中添加ROCK抑制剂Y-27632(10uM)可显著提高存活率
表达内皮标志物下降：传代次数控制在3代以内，冻存早期细胞以备后续使用
大鼠溶质载体家族蛋白 26成员5(SLC26A5；Prestin)elisa试剂盒 | Y3-Ag 1.2.3S210大鼠骨髓瘤细胞 |
大鼠粪臭素(skatole)elisa试剂盒 | 小鼠脊髓神经元细胞 |
大鼠血钾(SK)elisa试剂盒 | 小鼠肌腱干细胞 |
大鼠去乙酰化酶Sirtuin3(SIRT3)elisa试剂盒 | L2 (大鼠肺泡上皮细胞) |
大鼠α胞衬蛋白(α-fodrin)elisa试剂盒 | 猪内皮细胞PED(种属鉴定) |
大鼠α淀粉酶(α-AMS)elisa试剂盒 | 人膀胱癌相关成纤维细胞 |
猪卵泡抑素（FS）elisa试剂盒 | 兔原代肾周细胞 |
SK-N-MC人神经上皮瘤细胞专用培养基 | ENTPD2基因过表达细胞株 |
RBE人肝胆管癌细胞专用培养基 | DCLK3基因过表达细胞株 |
狗原代气管上皮细胞专用培养基 | PLEKHG7基因过表达细胞株 |
狗原代脐静脉内皮细胞专用培养基 | DENND2D基因过表达细胞株 |
人原代输精管平滑肌细胞专用培养基 | GAL3ST1基因过表达细胞株 |
兔小肠血管内皮细胞SK-GT-4细胞专用培养基 | ZXDA基因过表达细胞株 |
小鼠原代输尿管平滑肌细胞专用培养基 | CDC14A基因过表达细胞株 |
步骤一：小肠微血管组织无菌取材 无菌条件下摘取兔小肠系膜微血管组织，放入预冷无菌PBS中反复冲洗，彻底清除血液、杂质与脂肪组织，剔除粗大血管，保留细小微血管网络组织，修剪为微小组织碎块，全程低温无菌保护内皮细胞活性。
步骤二：微血管组织特异性消化 加入预热的0.1%Ⅱ型胶原酶消化液，完全浸没微血管组织碎块，37℃恒温避光消化12分钟，轻柔晃动培养容器，使消化液充分作用于微血管壁，解离内皮细胞。
步骤三：终止消化与细胞收集 消化达标后立即加入血管内皮细胞专用完全培养基终止酶活性，轻柔吹打组织混合液，使内皮细胞充分脱落分散，转移混合液至无菌离心管中，收集全部细胞样本。
步骤四：离心洗涤纯化细胞 1000rpm低速离心5分钟，弃上清去除消化液与组织残渣，保留细胞沉淀。无菌PBS轻柔重悬洗涤2次，彻底清除残留杂质，获得高纯度小肠血管内皮细胞。
步骤五：活性检测与浓度调整 专用培养基重悬细胞制备单细胞悬液，台盼蓝染色计数活细胞，统计细胞存活率，将细胞悬液浓度调整至7×10⁵个/mL，适配微血管内皮细胞贴壁、成管生长特性。
步骤六：包被培养板接种铺板 将细胞悬液接种至明胶包被的无菌培养板中，轻轻晃动均匀铺板，保障细胞贴壁稳固、分布均匀，标注细胞信息与接种参数。
步骤七：恒温培养与形态监测 放入37℃、5%CO₂培养箱静置培养24小时，完全贴壁后更换新鲜培养基，后续每48小时换液一次。每日观察内皮细胞多边形形态、紧密连接及微血管结构形成状态，及时排查异常。
