兔小肠平滑肌细胞

兔小肠平滑肌细胞

基于酶消化-差速贴壁联合策略从新西兰大白兔小肠平滑肌细胞组织获取平滑肌细胞，经 0.1% 胶原酶 IV 消化 2h 后通过 30% 胎牛血清梯度贴壁纯化，接种于纤连蛋白包被培养皿中，使用 DMEM 高糖培养基（含 15% FBS、10 ng/mL EGF 及 50 μg/mL 抗坏血酸）培养；通过免疫荧光双标检测 α-SMA/SM-MHC 共表达，RT-qPCR 分析平滑肌分化标志基因转录水平，并观察细胞在收缩刺激下的形态变化。

产品名称：兔小肠平滑肌细胞

英文名称： Rabbit Small Intestinal Smooth Muscle Cells

组织来源： 小肠组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔小肠平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的兔小肠平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  兔小肠平滑肌细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔小肠平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

步骤一：小肠肌层组织无菌制备 无菌摘取兔新鲜小肠组织，预冷PBS反复冲洗干净肠腔内容物，剥离小肠黏膜层与浆膜层，精准分离纯净小肠平滑肌肌层组织，剔除残留黏膜、血管与脂肪组织，将肌层组织修剪为1mm³左右细小碎块，全程低温无菌操作。

步骤二：组织酶解解离平滑肌细胞 向肌层组织碎块中加入预热的0.2%胶原酶-胰酶复合消化液，完全浸没组织，37℃水浴恒温消化15分钟，每隔5分钟轻摇一次，促进肌纤维解离，使平滑肌细胞充分脱离组织基质。

步骤三：终止消化与过滤除渣 消化完成后加入含血清完全培养基终止消化酶活性，轻柔吹打混合液，使细胞充分分散。经200目细胞筛过滤，去除未消化肌纤维组织残渣，收集均匀的平滑肌细胞悬液。

步骤四：离心洗涤纯化细胞样本 细胞悬液1100rpm离心6分钟，弃上清液，保留管底细胞沉淀。加入无菌预热PBS轻柔重悬，同等参数离心洗涤2次，彻底清除消化液残留、肌纤维碎片与代谢杂质。

步骤五：活细胞计数与浓度校准 用小肠平滑肌细胞专用完全培养基重悬细胞沉淀，制备单细胞悬液，台盼蓝染色筛选活细胞，精准计数后调整细胞浓度至6×10⁵个/mL，适配平滑肌细胞梭形贴壁增殖特性。

步骤六：规范接种均匀铺板 将调好浓度的细胞悬液接种至无菌培养瓶中，轻轻十字摇晃培养瓶，使细胞均匀分布于瓶底，避免局部细胞聚集。清晰标注细胞批次、接种时间、培养条件。

步骤七：恒温增殖培养与监测 置于37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱静置培养24小时，待细胞牢固贴壁后首次换液，后续每48小时更换新鲜培养基。每日观察细胞梭形形态、增殖速度与融合状态，及时处理污染、细胞老化等问题。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养器皿需提前用0.1mg/ml多聚赖氨酸包被过夜，未包被的培养板细胞贴壁效率极低。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。