兔小肠黏膜上皮细胞

兔小肠黏膜上皮细胞

基于组织块贴壁法从新西兰大白兔的小肠黏膜上皮细胞来源组织中获取初始细胞，经 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 传代后，采用特异性上皮细胞培养体系（K-SFM 基础培养基 supplemented with bovine pituitary extract）维持培养；通过免疫荧光双标技术检测 E-cadherin/CK5 共表达，Western blot 分析上皮标志蛋白表达谱，并结合Transwell模型评估细胞极化和紧密连接蛋白（ZO-1、Claudin）的定位表达。

产品名称：兔小肠黏膜上皮细胞

英文名称： Rabbit Small Intestinal Mucosal Epithelial Cells

组织来源： 小肠组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔小肠黏膜上皮细胞采用先机械分离法、后胶原酶消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔小肠黏膜上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 兔小肠黏膜上皮细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、Hydrocortisone、肾上腺素、甲状腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔小肠黏膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

步骤一：小肠组织无菌取材清洗 无菌条件下摘取兔新鲜小肠组织，快速放入预冷无菌PBS缓冲液中，反复冲洗小肠肠腔内壁，彻底清除肠道内容物、黏液与血迹，剔除肠壁外层肌肉、结缔组织，仅保留纯净小肠黏膜层组织，修剪为细小组织碎片。

步骤二：黏膜组织特异性消化 加入预热的0.15%胰蛋白酶-胶原酶复合消化液，完全浸没黏膜组织碎片，37℃恒温消化12分钟，每隔4分钟轻柔摇匀一次，促进消化液渗透黏膜组织，解离上皮细胞与基底组织，避免过度消化损伤细胞活性。

步骤三：终止消化与过滤收集 消化达标后立即加入含血清完全培养基终止酶活性，轻柔吹打混合液使细胞充分脱落分散，经200目无菌细胞筛过滤，去除未消化黏膜组织残渣，收集纯净上皮细胞悬液。

步骤四：离心洗涤纯化细胞 细胞悬液1200rpm离心6分钟，弃去上清杂质液，保留细胞沉淀。加入无菌预热PBS轻柔重悬洗涤，重复离心洗涤2次，彻底清除消化液、肠道杂质与死细胞，提升细胞纯度。

步骤五：计数与培养浓度调整 用小肠黏膜上皮细胞专用完全培养基重悬细胞，制备单细胞悬液，台盼蓝染色计数活细胞，将细胞浓度调整至7×10⁵个/mL，适配上皮细胞贴壁增殖、形成黏膜屏障结构的生长特性。

步骤六：均匀接种贴壁培养 将调好浓度的细胞悬液接种至无菌培养皿中，轻轻十字晃动铺匀，保证细胞均匀贴壁生长，无局部堆积。标注细胞名称、取材时间、接种参数，规范实验记录。

步骤七：恒温养护与定期换液 放入37℃、5%CO₂培养箱静置培养24小时，待细胞完全贴壁伸展后更换新鲜培养基，去除漂浮杂质与死细胞。后续每48小时换液一次，每日观察细胞形态、贴壁融合状态，及时排查污染与生长异常。

1.取材时需迅速分离目标血管组织，用含肝素的PBS冲洗管腔去除残留血液，整个过程控制在15分钟以内。

2.培养器皿需用0.2%明胶预包被30分钟，PBS洗涤后加入内皮细胞专用培养基方可接种。

3.该细胞体外可传10-15代，建议采用低代次细胞进行实验，高代次细胞可能出现表型漂移和凝集素摄取能力下降。

4.培养基中需添加EGM-2内皮细胞生长添加剂套装，包含VEGF、FGF-b、EGF和hydrocortisone等关键生长因子。

5.换液前预先检查培养基pH和颜色，若培养基过早变黄提示需缩短换液间隔至24小时。