产品名称 | 兔外周血单个核细胞 | 组织来源 | 血液组织 |
英文名称 | Rabbit Peripheral Blood Mononuclear Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2880 |
方法简介 实验室分离的兔外周血单个核细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来。
质量检测 实验室分离的兔外周血单个核细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 兔外周血单个核细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 悬浮
细胞形态： 圆形
传代比例： 不传代
传代特性： 不增殖；不传代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔外周血单个核细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，采集血液或提取组织免疫细胞
试剂：Ficoll密度梯度分离液、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、RPIM-1640或DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
采集实验动物全血或获取组织悬液，用PBS稀释至适当体积
缓慢叠加于Ficoll密度梯度分离液上方，室温2000rpm离心20分钟
收集界面白色单个核细胞层，用PBS洗涤2次，300g离心8分钟
用含10%FBS的RPIM-1640完全培养基重悬细胞，计数并检测活力
可采用磁珠分选法进一步富集目标免疫细胞亚群(如CD11b+巨噬细胞、CD3+T细胞等)
原代培养要点
免疫细胞多为悬浮或弱贴壁生长，使用完全培养基RPIM-1640+10%FBS+1%双抗
37度、5% CO2培养，初始接种密度建议1x10^6 cells/mL
巨噬细胞培养可添加M-CSF(20ng/mL)促进增殖和维持表型
T细胞培养需添加IL-2(10ng/mL)和抗CD3/CD28抗体刺激增殖
常见问题优化
免疫细胞活力差：操作全程保持低温，避免反复离心和吹打
细胞凋亡：培养基中添加IL-4(20ng/mL)和IL-10(10ng/mL)可抑制巨噬细胞凋亡
纯度不够：采用MACS磁珠分选可获得纯度>95%的目标免疫细胞
大鼠可溶性低密度脂蛋白受体相关蛋白1(sLRP1)elisa试剂盒 | NB-4白血病 |
大鼠SLK蛋白(Slk；FYN)elisa试剂盒 | 小鼠脂肪微血管内皮细胞 |
大鼠Slit同源物1(slit1)elisa试剂盒 | 小鼠子宫内膜基质细胞 |
大鼠溶质载体家族2成员1(SLC2A1)elisa试剂盒 | VERO C1008 [Vero E6] (非洲绿猴肾细胞) |
大鼠α1-微球蛋白(α1-MG)elisa试剂盒 | 人卵巢癌细胞HO-8910（STR鉴定正确) |
大鼠α2 肾上腺素能受体(α2ADR)elisa试剂盒 | 人牙髓干细胞 |
猪免疫球蛋白A（IgA）elisa试剂盒 | 大鼠原代牙周膜干细胞 |
SK-MEL-2+LUC人皮肤黑色素瘤荧光素酶标记细胞专用培养基 | SANBR基因过表达细胞株 |
MT-4人急性淋巴母白血病细胞专用培养基 | AIFM2基因过表达细胞株 |
兔原代骨细胞专用培养基 | CSPG5基因过表达细胞株 |
大鼠原代角膜基质细胞专用培养基 | CATSPER4基因过表达细胞株 |
人原代髓核细胞专用培养基 | DCST2基因过表达细胞株 |
兔外周血单个核细胞SHP-77细胞专用培养基 | ATG4C基因过表达细胞株 |
狗原代脐静脉内皮细胞专用培养基 | ENOX1基因过表达细胞株 |
步骤一：无菌样本制备与试剂准备 超净台提前紫外灭菌30分钟，备好无菌抗凝管、PBS缓冲液、人/兔专用淋巴细胞分离液、单个核细胞专用培养基。无菌采集兔外周血，肝素抗凝后轻柔混匀，避免溶血，将抗凝血与无菌PBS1:1稀释，充分吹打均匀，保证样本无血凝块、无杂质。
步骤二：精准密度梯度离心分层 取无菌离心管，先加入淋巴细胞分离液，再将稀释血液样本缓慢平铺于分离液上层，严格保持液层清晰，避免冲击混合。设置离心参数2200rpm、20分钟，低速升降速，离心后液体分为四层，第二层云雾状白膜层即为外周血单个核细胞，包含淋巴细胞、单核细胞。
步骤三：目标细胞提取收集 平稳取出离心管，杜绝震荡分层，用无菌移液枪精准吸取中间白膜层细胞，转移至新的无菌15mL离心管中，全程轻柔操作，减少细胞破损。避免吸取上层血浆与下层红细胞、粒细胞杂质，最大程度提升单个核细胞纯度。
步骤四：多次洗涤纯化细胞 向收集的细胞中加入5mL无菌预热PBS缓冲液，轻柔吹打混匀，1800rpm离心6分钟，弃上清去除残留分离液与杂质。重复PBS洗涤2次，彻底清除杂细胞、蛋白残留，获得高纯度单个核细胞沉淀。
步骤五：活性检测与浓度校准 用少量单个核细胞专用完全培养基重悬细胞沉淀，台盼蓝染色后显微镜下计数活细胞，统计细胞存活率，剔除死细胞干扰。将细胞悬液浓度精准调整至7×10⁵个/mL，适配单个核细胞悬浮生长特性。
步骤六：悬浮接种铺板处理 将校准浓度的细胞悬液均匀接种至无菌培养板/培养瓶中，轻轻晃动培养容器，使细胞均匀悬浮分布，无局部聚集。清晰标注细胞名称、样本来源、接种日期等关键信息，规范实验操作记录。
步骤七：恒温培养与动态养护 置于37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱中静置悬浮培养，12小时后首次观察细胞状态，更换半量新鲜培养基，去除死细胞。后续每日观察细胞活性、形态变化，每24小时半量换液，维持培养基营养稳定，保障细胞正常存活增殖。
