产品名称 | 兔外周血白细胞 | 组织来源 | 血液组织 |
英文名称 | Rabbit Peripheral Blood Leukocytes | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2876 |
方法简介 实验室分离的兔外周血白细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来。
质量检测 实验室分离的兔外周血白细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 兔外周血白细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 悬浮
细胞形态： 圆形
传代比例： 不传代
传代特性： 不增殖；不传代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔外周血白细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，采集血液或提取组织免疫细胞
试剂：Ficoll密度梯度分离液、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、RPIM-1640或DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
采集实验动物全血或获取组织悬液，用PBS稀释至适当体积
缓慢叠加于Ficoll密度梯度分离液上方，室温2000rpm离心20分钟
收集界面白色单个核细胞层，用PBS洗涤2次，300g离心8分钟
用含10%FBS的RPIM-1640完全培养基重悬细胞，计数并检测活力
可采用磁珠分选法进一步富集目标免疫细胞亚群(如CD11b+巨噬细胞、CD3+T细胞等)
原代培养要点
免疫细胞多为悬浮或弱贴壁生长，使用完全培养基RPIM-1640+10%FBS+1%双抗
37度、5% CO2培养，初始接种密度建议1x10^6 cells/mL
巨噬细胞培养可添加M-CSF(20ng/mL)促进增殖和维持表型
T细胞培养需添加IL-2(10ng/mL)和抗CD3/CD28抗体刺激增殖
常见问题优化
免疫细胞活力差：操作全程保持低温，避免反复离心和吹打
细胞凋亡：培养基中添加IL-4(20ng/mL)和IL-10(10ng/mL)可抑制巨噬细胞凋亡
纯度不够：采用MACS磁珠分选可获得纯度>95%的目标免疫细胞
大鼠可溶性肝X受体(sLXR)elisa试剂盒 | MT-2白血病 |
大鼠可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(sLOX-1)elisa试剂盒 | 小鼠表皮干细胞 |
大鼠神经生长导向因子(SLIT3)elisa试剂盒 | 小鼠睾丸间质细胞 |
大鼠溶质载体家族39成员4(SLC39A4)elisa试剂盒 | MA-104 [MA 104; MA104] (非洲绿猴胚胎肾细胞) |
大鼠α1酸性糖蛋白1(ORM1)elisa试剂盒 | 人微血管内皮细胞株HMEC-1(STR鉴定正确) |
大鼠α1纤溶酶抑制因子(α1-PI)elisa试剂盒 | 人胰腺星状细胞 |
猪免疫球蛋白D（IgD）elisa试剂盒 | 大鼠原代海马神经干细胞 |
SK-MEL-2人皮肤黑色素瘤细胞专用培养基 | GALNTL5基因过表达细胞株 |
MS751人子宫颈表皮癌细胞专用培养基 | DIPK1B基因过表达细胞株 |
大鼠原代肾动脉内皮细胞专用培养基 | ENO4基因过表达细胞株 |
小鼠原代主动脉瓣膜间质细胞专用培养基 | DEUP1基因过表达细胞株 |
人原代胎盘间充质干细胞专用培养基 | ZNF711基因过表达细胞株 |
兔外周血白细胞SGC-7901细胞专用培养基 | CDC14A基因过表达细胞株 |
人原代宫颈癌相关成纤维细胞专用培养基 | BMP7基因过表达细胞株 |
步骤一：无菌采血与样本预处理 提前备好无菌采血针、抗凝离心管、PBS缓冲液、淋巴细胞分离液，超净台紫外灭菌30分钟。无菌采集兔外周静脉血，立即注入含肝素抗凝剂的无菌离心管中，轻柔颠倒混匀5-8次，防止血液凝固，全程低温无菌操作，避免白细胞活化破损。将抗凝血与无菌PBS按1:1比例稀释，充分混匀备用。
步骤二：密度梯度分层分离细胞 取无菌15mL离心管，缓慢加入适量兔淋巴细胞分离液，将稀释后的外周血样本轻柔叠加在分离液液面上方，严格保持两层液体界面清晰，无混合、浑浊现象。设置离心参数2000rpm、离心20分钟、升降速调至最低，完成密度梯度离心，离心后液体分层，中间白膜层即为外周血白细胞层。
步骤三：白细胞提取与初步洗涤 离心结束后平稳取出离心管，避免震荡分层液体，用无菌移液枪缓慢吸取中间乳白色白膜层细胞，转移至全新无菌离心管中。加入4mL无菌PBS缓冲液，轻柔吹打混匀，以1500rpm离心8分钟，弃去上清液，去除分离液残留、红细胞碎片与血浆杂质。
步骤四：细胞纯化去除杂细胞 向细胞沉淀中加入3mL预热PBS重悬细胞，再次1500rpm离心洗涤8分钟，重复洗涤2次，彻底清除残留分离液与杂细胞。洗涤完成后加入适量白细胞专用完全培养基，轻柔吹打分散细胞沉淀，制备初步细胞悬液，去除残留团聚细胞。
步骤五：活细胞计数与浓度调整 吸取少量细胞悬液，采用台盼蓝染色法鉴别活死细胞，通过血球计数板精准计数活白细胞数量。根据实验需求调整细胞悬液浓度，常规培养浓度调整至8×10⁵个/mL，保障白细胞存活稳定、活性良好，满足后续培养与实验检测需求。
步骤六：细胞接种悬浮培养 将调好浓度的白细胞悬液接种至无菌细胞培养板中，无需贴壁处理，均匀分配每孔细胞悬液体积，轻轻晃动培养板使细胞均匀悬浮分布。标注细胞样本信息、接种时间、浓度参数，做好实验溯源记录。
步骤七：恒温悬浮培养与监测 将培养板置于37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱中悬浮培养，静置12小时后观察细胞存活状态，去除死亡漂浮细胞。后续每24小时半量更换新鲜完全培养基，每日监测细胞活性、数量变化，及时排查污染与细胞凋亡异常情况。
