产品名称 | 兔肾脏巨噬细胞 | 组织来源 | 肾组织 |
英文名称 | Rabbit Renal Macrophages | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3680 |
方法简介 实验室分离的兔肾脏巨噬细胞采用酶消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的兔肾脏巨噬细胞经CD68免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 兔肾脏巨噬细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、M-CSF、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 巨噬细胞样
传代比例： 不传代
传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液： 利多卡因（12 mM）
兔肾脏巨噬细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，采集血液或提取组织免疫细胞
试剂：Ficoll密度梯度分离液、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、RPIM-1640或DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
采集实验动物全血或获取组织悬液，用PBS稀释至适当体积
缓慢叠加于Ficoll密度梯度分离液上方，室温2000rpm离心20分钟
收集界面白色单个核细胞层，用PBS洗涤2次，300g离心8分钟
用含10%FBS的RPIM-1640完全培养基重悬细胞，计数并检测活力
可采用磁珠分选法进一步富集目标免疫细胞亚群(如CD11b+巨噬细胞、CD3+T细胞等)
原代培养要点
免疫细胞多为悬浮或弱贴壁生长，使用完全培养基RPIM-1640+10%FBS+1%双抗
37度、5% CO2培养，初始接种密度建议1x10^6 cells/mL
巨噬细胞培养可添加M-CSF(20ng/mL)促进增殖和维持表型
T细胞培养需添加IL-2(10ng/mL)和抗CD3/CD28抗体刺激增殖
常见问题优化
免疫细胞活力差：操作全程保持低温，避免反复离心和吹打
细胞凋亡：培养基中添加IL-4(20ng/mL)和IL-10(10ng/mL)可抑制巨噬细胞凋亡
纯度不够：采用MACS磁珠分选可获得纯度>95%的目标免疫细胞
大鼠Smad同源物4(Smad4)elisa试剂盒 | COS-1转化的非洲绿猴肾细胞 |
大鼠非磷酸化细胞信号转导分子(SMAD-2)elisa试剂盒 | 小鼠子宫内膜上皮细胞 |
大鼠信号转导分子1(Smad1)elisa试剂盒 | 小鼠甲状腺上皮细胞 |
大鼠鞘磷脂(SM)elisa试剂盒 | L-WRN（小鼠皮下结缔组织细胞） |
大鼠X框结合蛋白(XBP1)elisa试剂盒 | 人骨髓增生异常综合征细胞株 MUTZ-1(STR鉴定正确) |
大鼠X型胶原(Col X)elisa试剂盒 | 人肛门上皮细胞 |
猪免疫球蛋白M（IgM）elisa试剂盒 | 人原代尾椎肿瘤细胞 |
SK-BR-3+LUC人乳腺癌细胞专用培养基 | GABRA2基因过表达细胞株 |
MM.1S人多发性骨髓瘤细胞专用培养基 | C12orf56基因过表达细胞株 |
兔原代海绵体内皮细胞专用培养基 | ZMYND15基因过表达细胞株 |
大鼠原代颈动脉成纤维细胞专用培养基 | GPR21基因过表达细胞株 |
人原代外周血间充质干细胞专用培养基 | DDI2基因过表达细胞株 |
兔肾脏巨噬细胞SCC-7细胞专用培养基 | ENOX1基因过表达细胞株 |
小鼠原代主动脉瓣膜间质细胞专用培养基 | ARSF基因过表达细胞株 |
倒置显微镜观察兔肾脏巨噬细胞，细胞汇合 75‑80% 进行传代，细胞无异常活化、无微生物污染，吸除瓶内旧培养基。
无菌 PBS 缓冲液加入培养瓶洗涤贴壁细胞 2 次，缓慢摇晃容器洗去漂浮碎片，洗涤结束彻底吸净 PBS。
加入预热胰酶‑EDTA 消化液浸润细胞层，37℃5% CO₂培养箱消化 3‑5min，镜下细胞脱离瓶壁、形态变圆，立即终止消化。
添加含血清完全培养基中和胰酶活性，轻柔吹打瓶壁，收集巨噬细胞制备细胞悬液，操作尽量减少刺激，防止细胞激活。
全部细胞悬液转入无菌离心管，1000r/min 离心 5min，离心完成，小心吸弃上清废液，留存细胞沉淀。
巨噬细胞专用完全培养基重悬沉淀，充分混匀，细胞计数，按照实验密度接种新培养器皿。
平缓晃动培养瓶分散细胞，放置 37℃、5% CO₂培养箱，24h 观察贴壁状态，每 2‑3 天更换培养基。
