兔肾小球内皮细胞

兔肾小球内皮细胞

采用胶原酶 II 消化法从新西兰大白兔的肾小球内皮细胞来源血管组织中分离内皮细胞，经预纯化（低贴壁培养去除成纤维细胞）后，接种于胶原 I 包被的培养皿中，使用 EGM-2 内皮专用培养基（含 VEGF、bFGF、EGF 及肝素）培养；通过免疫荧光染色检测 CD31（PECAM-1）、VE-cadherin、vWF 及 CD34 等内皮标志物，结合 Dil-acLDL 摄取实验和 CD31/VE-cadherin 双标免疫荧光确认内皮细胞身份与纯度。

产品名称：兔肾小球内皮细胞

英文名称： Rabbit Glomerular Endothelial Cells

组织来源： 肾组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔肾小球内皮细胞采用先机械研磨过不锈钢网筛分离得到肾小球、后用胶原酶消化，结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔肾小球内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 兔肾小球内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔肾小球内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

显微镜检视兔肾小球内皮细胞，汇合 70‑75% 即可传代，该细胞增殖速度偏慢，确认无杂菌污染，吸除旧培养基。

使用无菌 PBS 缓冲液轻柔洗涤细胞贴壁面 2 次，轻晃瓶子清除漂浮碎片，洗涤后完全吸除 PBS 废液。

加入预热内皮细胞消化工作液覆盖细胞层，37℃5% CO₂培养箱消化 2‑3min，镜下细胞回缩变圆，马上终止消化，严格控制消化时间。

加入肾小球内皮细胞完全培养基中和消化液，使用大口径枪头轻柔吹打，使细胞脱落，避免强力吹打损伤细胞。

细胞悬液转移无菌离心管，1000r/min 离心 5min，离心完毕，小心去除上层上清液。

肾小球内皮细胞完全培养基重悬底部沉淀，混匀后细胞计数，接种于明胶包被的新培养瓶。

平稳移动培养瓶，轻晃分散细胞，置于 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，24h 观察贴壁，每 2‑3 天更换新鲜完全培养基。

1.手术获取组织后需立即在显微镜下剥离平滑肌层，避免成纤维细胞等杂细胞过度污染。

2.培养器皿无需特殊包被，普通培养板即可支持平滑肌细胞贴壁，但用纤连蛋白包被可增强细胞贴附。

3.平滑肌细胞体外可增殖，传代比例1:3至1:4，细胞长至80-90%融合时进行胰酶消化传代。

4.在DMEM培养基中补充10-20%FBS及1%青霉素-链霉素即可满足生长需求，必要时添加10ng/ml EGF。

5.换液时每2-3天更换一次新鲜培养基，注意观察细胞形态变化，收缩型细胞呈梭形峰谷状排列。