产品名称 | 兔肾动脉内皮细胞 | 组织来源 | 肾组织 |
英文名称 | Rabbit Renal Artery Endothelial Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3621 |
方法简介 实验室分离的兔肾动脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔肾动脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）
培养基： 兔肾动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔肾动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，每只可获得2-5x10^5个内皮细胞，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、兔抗细胞CD31抗体(用于流式分选)、ECM基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标血管/组织，用预冷PBS冲洗去除血液，仔细分离去除外膜和脂肪组织
将组织剪碎后加入0.25%胰蛋白酶，37度消化15-20分钟，收集消化液
再加入II型胶原酶，37度振荡消化45-60分钟，充分分散组织
消化液经70um和40um滤网依次过滤，300g离心10分钟收集细胞
用含CD31抗体的磁珠进行阳性/阴性分选，或采用差速贴壁法去除成纤维细胞，收集CD31+内皮细胞
原代培养要点
将纯化后的内皮细胞接种于明胶预包被的培养皿中，使用ECM基质胶包被可显著提高贴壁率
接种密度建议3x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养，内皮细胞通常24-72小时贴壁
使用内皮细胞专用培养基(含20%FBS、EGF 5ng/mL、FGF 2ng/mL、肝素10ug/mL)
每2-3天换液一次，细胞融合至80-90%时可用0.05%胰蛋白酶-EDTA传代
常见问题优化
内皮细胞被成纤维细胞污染：采用差速贴壁法2-3次，或CD31磁珠分选提高纯度
内皮细胞凋亡：培养基中添加ROCK抑制剂Y-27632(10uM)可显著提高存活率
表达内皮标志物下降：传代次数控制在3代以内，冻存早期细胞以备后续使用
大鼠母亲DDP同源物8(Smad8)elisa试剂盒 | U87MG+RFP人脑星形胶质母细胞瘤+RFP |
大鼠母亲DDP同源物5(Smad5)elisa试剂盒 | 小鼠肾近端小管上皮细胞 |
大鼠非磷酸化细胞信号转导分子(SMAD-3)elisa试剂盒 | 小鼠肝卵圆细胞 |
大鼠母亲DDP同源物2(Smad2)elisa试剂盒 | M2-10B4 (小鼠骨髓纤维原细胞) |
大鼠V-Maf肌肉腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A(MAFA)elisa试剂盒 | 人骨髓瘤细胞NCI-H929(STR鉴定正确) |
大鼠V型胶原蛋白酶(Colase V)elisa试剂盒 | 大鼠腹腔主动脉平滑肌细胞 |
猪膜辅蛋白（CD46）elisa试剂盒 | 猪原代颈动脉平滑肌细胞 |
NCI-H524人非小肺癌细胞专用培养基 | PKD2L1基因过表达细胞株 |
MKN-74人胃癌细胞专用培养基 | PROX1基因过表达细胞株 |
小鼠原代骨骼肌成纤维细胞专用培养基 | TLR6基因过表达细胞株 |
人原代肺癌成纤维细胞专用培养基 | ZXDA基因过表达细胞株 |
人原代胃肠道间质瘤细胞专用培养基 | GRPR基因过表达细胞株 |
兔肾动脉内皮细胞SCaBER细胞专用培养基 | ANGPT4基因过表达细胞株 |
人原代胰腺导管上皮细胞专用培养基 | PTCD1基因过表达细胞株 |
倒置显微镜观察兔肾动脉内皮细胞，汇合 75‑80% 传代，细胞鹅卵石样形态，无污染，吸除培养瓶旧培养基。
无菌 PBS 缓冲液漂洗细胞贴壁面 2 次，缓慢晃动瓶子清除代谢残渣，漂洗完毕彻底吸净 PBS 液体。
预热内皮细胞专用消化液加入瓶内覆盖细胞，37℃CO₂培养箱消化 2‑4min，镜下细胞变圆，细胞间连接松开，立即终止消化；内皮细胞对胰酶敏感，严控消化时长。
加入内皮细胞完全培养基中和消化液，温和吹打瓶壁，剥离内皮细胞，尽量减少气泡，避免损伤细胞膜。
细胞悬液转入无菌离心管，1000r/min 离心 5min，离心完成，小心去除上清废液，保留细胞沉淀。
兔肾动脉内皮细胞完全培养基重悬沉淀，充分混匀，细胞计数，接种到明胶包被的新培养瓶。
平稳晃动培养瓶使细胞均匀分布，放入 37℃、5% CO₂培养箱，24h 查看贴壁，每 2‑3 天更换完全培养基，避免过度汇合。
