兔神经小胶质细胞

兔神经小胶质细胞

运用酶消化-摇床振荡联合法从新西兰大白兔神经小胶质细胞新生鼠脑组织中分离原代胶质细胞，经密度梯度离心纯化后接种于纤连蛋白包被的培养表面，使用含 10% FBS 和 20 ng/mL PDGF-AA 的 DMEM/F12 培养基培养少突胶质前体细胞；通过免疫荧光检测 NG2、Olig2、PDGFR-α 表达，Western blot 分析 MBP（髓鞘碱性蛋白）和 CNPase 分化标志物，并经诱导分化实验验证髓鞘形成潜能。

产品名称：兔神经小胶质细胞

英文名称： Rabbit Microglial Cells

组织来源： 脑组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔神经小胶质细胞采用酶消化法结合差速贴壁法，在培养基营养缺失数天后经摇床震荡收集脱落细胞制备而来。

质量检测  实验室分离的兔神经小胶质细胞经CD11b免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  兔神经小胶质细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、多角形

传代比例： 不传代

传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液： 利多卡因（12 mM）

兔神经小胶质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

显微镜观察兔神经小胶质细胞，细胞汇合 75‑80% 进行传代，细胞形态无异常活化，无杂菌污染，吸除瓶内旧培养基。

无菌 PBS 缓冲液加入培养瓶洗涤贴壁细胞 2 次，轻晃容器洗去漂浮碎片，洗涤结束完全吸除 PBS 废液。

加入预热胰酶‑EDTA 消化液覆盖细胞层，37℃5% CO₂培养箱消化 3‑5min，镜下细胞脱离基底、形态变圆，立即终止消化。

加入含血清完全培养基中和胰酶，温和吹打瓶壁，将小胶质细胞吹打下来，制备细胞悬液，避免过度刺激造成细胞活化。

全部悬液转入无菌离心管，1000r/min 离心 5min，离心完毕，小心吸弃上清，留存底部细胞沉淀。

小胶质细胞完全培养基重悬沉淀，混匀后细胞计数，按实验密度接种至新无菌培养容器。

平缓晃动培养瓶分散细胞，置于 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，24h 观察贴壁状态，每 2‑3 天更换培养基，减少外界刺激防止细胞激活。

1.组织取材后迅速置于含抗生素的PBS中清洗，去除血液和结缔组织外膜后剪碎备用。

2.培养器皿无需特殊包被，成纤维细胞具有较强的自主贴壁和铺展能力，常规培养皿即可。

3.细胞生长速率受血清批次影响较大，建议实验前对不同批次血清进行预实验筛选。

4.培养基中添加10-15%胎牛血清即可满足成纤维细胞生长需求，高血清浓度可加速细胞增殖。

5.实验选用新西兰白兔或日本大耳兔，需注意兔源细胞的种属特异性差异。 换液时每2-3天更换一次新鲜培养基，成纤维细胞代谢旺盛需及时补充营养和清除代谢产物。