产品名称 | 兔三叉神经元细胞 | 组织来源 | 三叉神经组织 |
英文名称 | Rabbit Trigeminal Neurons | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3821 |
方法简介 实验室分离的兔三叉神经元细胞采用胰蛋白酶消化法结合神经元专用培养基培养、化学试剂抑制法筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔三叉神经元细胞经β-Tubulin-Ⅲ免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 兔三叉神经元细胞完全培养基(基础培养基，含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 神经元细胞样
传代比例： 不传代
传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔三叉神经元细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，需快速取材以保证神经元活力
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、Neurobasal培养基、B27添加剂、NGF、BDNF、NT-3、聚赖氨酸、脑基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标脑区/脊髓/神经组织，用预冷无钙镁PBS仔细冲洗
在显微镜下仔细分离目标区域，去除血管和膜组织，剪碎至1mm3
用0.25%胰蛋白酶在37度消化15-20分钟，加入DNase I辅助消化
用含FBS的DMEM终止消化，移液器轻柔吹打制成单细胞悬液
经40um滤网过滤后，300g离心5分钟收集神经元细胞
原代培养要点
将神经元细胞接种于聚赖氨酸包被的盖玻片或培养皿中，使用Neurobasal+B27培养基
接种密度建议1-2x10^5 cells/cm2，37度、5% CO2、95%湿度培养
神经元培养需添加NGF(10ng/mL)、BDNF(10ng/mL)等神经营养因子
7-14天后可观察到明显的神经元突起生长，21天后形成神经网络
常见问题优化
神经元存活率低：培养基中添加GlutaMAX和丙酮酸钠可提高神经元存活率
胶质细胞过度生长：使用Ara-C(10uM)处理可抑制胶质细胞增殖
神经元突起生长不良：添加NGF、BDNF等神经营养因子，使用脑基质胶包被基底
大鼠细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS-1)elisa试剂盒 | CatS2家猫皮肤成纤维细胞 |
大鼠可溶性间皮素相关肽(SMRP)elisa试剂盒 | 兔胎盘间充质干细胞 |
大鼠母亲DDP同源物8(Smad8)elisa试剂盒 | 兔嗅鞘细胞 |
大鼠母亲DDP同源物5(Smad5)elisa试剂盒 | 大鼠肾动脉内皮细胞 |
大鼠UDP葡糖醛酸基转移酶2家族多肽B(UGT2B)elisa试剂盒 | 鼻咽癌细胞株 6-10b(STR鉴定正确) |
大鼠UDP葡萄糖醛酸转移酶2家族多肽B1(UGT2B1)elisa试剂盒 | 小鼠角质形成细胞 |
猪木聚糖酶（Xylanase）elisa试剂盒 | 兔原代真皮毛乳头细胞 |
NCI-H520人肺鳞癌细胞专用培养基 | EBF1基因过表达细胞株 |
MIA-PACA-2人胰腺癌细胞专用培养基 | DENND2D基因过表达细胞株 |
小鼠原代肾上腺髓质细胞专用培养基 | BCLAF3基因过表达细胞株 |
狗原代气管上皮细胞专用培养基 | ANKRD33基因过表达细胞株 |
人原代下腔静脉平滑肌细胞专用培养基 | LPO基因过表达细胞株 |
兔三叉神经元细胞SACC-83细胞专用培养基 | GALNTL5基因过表达细胞株 |
大鼠原代颈动脉成纤维细胞专用培养基 | ADRA2C基因过表达细胞株 |
倒置显微镜观察兔三叉神经元细胞，神经元不适合高密度传代，以半换液维护；细胞状态良好，无碎片堆积，小心吸弃一半旧培养基，不要扰动贴壁神经元。
加入预热无菌 PBS 缓冲液轻柔润洗细胞培养层 1 次，动作极轻，避免冲掉贴壁神经元，润洗完成后缓慢吸除 PBS。
加入温和神经元专用消化工作液，覆盖细胞表面，37℃培养箱孵育 2‑3min，镜下观察胞体轻微回缩，立刻终止消化，严格缩短消化时间，神经元极易损伤。
添加神经元完全培养基中和消化液，使用大口径移液管，低速轻柔吹打，剥离神经元细胞，禁止剧烈吹打，减少神经突起断裂。
细胞悬液转移无菌离心管，800r/min 低速离心 6min，降低离心力保护脆弱神经元，离心后小心移除上层上清液。
兔三叉神经元细胞专用完全培养基重悬细胞沉淀，轻柔混匀，进行细胞计数，按照实验需求接种多聚赖氨酸包被好的培养板 / 瓶。
平稳移动培养器皿，杜绝剧烈晃动，放置 37℃、5% CO₂培养箱静置培养，24h 观察神经元贴壁与突起生长，每 2‑3 天半量更换培养基。
