兔乳腺上皮细胞

兔乳腺上皮细胞

采用Ⅱ型胶原酶联合 Dispase 对新西兰大白兔的乳腺上皮细胞进行原代消化分离，经密度梯度离心纯化后接种于明胶预包被的培养皿中，使用 Keratinocyte-SFM 培养基（含 EGF 和 B27 添加剂）在 37°C、5% CO₂ 条件下培养；通过免疫荧光染色检测角蛋白（Keratin）5/8、细胞角蛋白 14（KRT14）及 E-cadherin 等上皮细胞特异性标志物表达，结合倒置显微镜观察细胞贴壁后呈铺路石样多边形 morphology 特征，并经 RT-qPCR 验证上皮标志基因表达水平

产品名称：兔乳腺上皮细胞

英文名称： Rabbit Mammary Epithelial Cells

组织来源： 乳腺组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔乳腺上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔乳腺上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 兔乳腺上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔乳腺上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

显微镜检查兔乳腺上皮细胞，细胞汇合 80% 左右开展传代，观察上皮鹅卵石样形态，排除细菌真菌污染，吸弃旧培养基。

无菌 PBS 缓冲液加入培养瓶漂洗细胞层 2 次，轻晃培养瓶洗去代谢物，漂洗后彻底吸除 PBS 液体。

加入预热胰酶消化液覆盖细胞，置于 37℃CO₂培养箱消化 2‑4min，镜下细胞变圆、细胞簇散开，立刻终止消化。

加入含血清完全培养基中和胰酶活性，温和吹打瓶壁，将上皮细胞吹落，尽量减少吹打气泡，防止上皮细胞损伤。

细胞悬液转移无菌离心管，1000r/min 离心 5min，离心完成，小心去除上清废液，保留细胞沉淀。

使用乳腺上皮细胞完全培养基重悬沉淀，混匀后计数，调整合适细胞密度接种新培养容器。

水平晃动培养瓶使细胞均匀分布，放入 37℃、5% CO₂培养箱，24h 观察贴壁，每 2‑3 天更换培养基，上皮细胞不要过度消化。

1.取材后需立即将组织置于含10%胎牛血清的Hanks液中运输，4度条件下尽快完成目标脑区的分离与纯化。

2.培养表面需用0.01mg/ml纤连蛋白和0.1mg/ml多聚赖氨酸双重包被，神经元贴壁率和轴突延伸长度均有显著提升。

3.该细胞类型体外寿命有限，分离后需尽快进行实验分析，超过10天培养后大部分神经元会出现退行性改变。

4.培养基中必须添加NGF(神经生长因子)20ng/ml和B27添加剂，培养24小时后可显著促进神经元存活和轴突延伸。

5.培养期间每2-3天半量换液一次，换液时用移液枪沿壁缓慢加入避免产生液流剪切力损伤神经元突起。