产品名称 | 兔前列腺平滑肌细胞 | 组织来源 | 前列腺 |
英文名称 | Rabbit Prostate Smooth Muscle Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3703 |
方法简介 实验室分离的兔前列腺平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的兔前列腺平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 兔前列腺平滑肌细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔前列腺平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，组织取材需保持血管/器官完整性
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、平滑肌细胞专用培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织(血管/器官平滑肌层)，用预冷PBS反复冲洗去除血液
仔细分离去除外膜和黏膜层，仅保留平滑肌层组织，剪碎至1-2mm3
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合液，37度消化40-60分钟，期间振荡2-3次
消化完成后过滤(70um+40um)，300g离心10分钟收集细胞沉淀
细胞悬液接种于培养皿中，采用差速贴壁法24小时后换液去除非贴壁细胞
原代培养要点
平滑肌细胞贴壁能力较强，接种后24-48小时可见贴壁细胞呈梭形生长
使用含20%FBS的DMEM/F12完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时进行传代
平滑肌细胞传代时使用0.25%胰蛋白酶消化5-10分钟，离心收集后重新接种
常见问题优化
细胞纯度不高：可采用药物筛选法(5-氟尿嘧啶20uM处理48小时去除非平滑肌细胞)
平滑肌细胞表型转换：控制传代次数在5代以内，培养基中保持适当FBS浓度(10-20%)
细胞生长缓慢：添加10ng/mL PDGF-BB可促进平滑肌细胞增殖
大鼠超氧化物歧化酶2(SOD2)elisa试剂盒 | Malme-3M黑素瘤 |
大鼠线粒体超氧化物歧化酶(SOD)elisa试剂盒 | 兔脉络膜微血管内皮细胞 |
大鼠细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS-1)elisa试剂盒 | 兔脑动脉血管内皮细胞 |
大鼠可溶性间皮素相关肽(SMRP)elisa试剂盒 | 小鼠子宫成纤维细胞 |
大鼠UDP葡糖醛酸基转移酶1家族多肽A3(UGT1A3)elisa试剂盒 | 人脑星形胶质母细胞瘤U-118 MG(STR鉴定正确) |
大鼠UDP葡糖醛酸基转移酶1家族多肽A6(UGT1A6)elisa试剂盒 | 牛前脂肪细胞 |
猪脑磷脂（cephalin）elisa试剂盒 | 小鼠原代子宫内膜基质细胞 |
NCI-H446人小肺癌细胞专用培养基 | ANKRD53基因过表达细胞株 |
MHCC-97H+luc人高转移性肝癌荧光素酶标记细胞专用培养基 | DTX3基因过表达细胞株 |
羊原代肺成纤维细胞专用培养基 | BSPRY基因过表达细胞株 |
大鼠原代DRG神经元细胞专用培养基 | CDC14A基因过表达细胞株 |
人原代小胶质细胞专用培养基 | RSPH6A基因过表达细胞株 |
兔前列腺平滑肌细胞RT112细胞专用培养基 | PTCD1基因过表达细胞株 |
人原代胎盘周细胞专用培养基 | GALNT9基因过表达细胞株 |
倒置显微镜检视兔前列腺平滑肌细胞，细胞汇合度 80% 左右进行传代处理，排查细胞污染、细胞肥大老化现象，吸走瓶内旧培养基。
倒入无菌 PBS 缓冲液清洗细胞贴壁层 2 次，轻轻晃动培养瓶，去除代谢废物以及残留血清，洗涤之后彻底吸除 PBS。
加入预热胰酶‑EDTA 消化液覆盖细胞，置于 37℃CO₂培养箱消化 3‑6min，镜下细胞收缩变圆、细胞间分离，立刻终止消化反应。
添加足量含血清完全培养基中和胰酶活性，使用移液管温和吹打瓶壁，将长梭形平滑肌细胞剥离，制备细胞悬液，严禁暴力吹打破坏细胞膜。
将细胞悬液转移无菌离心管，1000r/min 离心 5min，离心结束，小心吸取丢弃上清液，保护底部细胞沉淀不被吸走。
加入预热完全培养基重悬细胞沉淀，充分混匀，完成细胞计数，按照实验所需密度接种至新培养瓶或者培养板。
平稳晃动培养瓶使细胞均匀铺展，置于 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱培养，24h 观察贴壁伸展状态，每 2‑3 天换液，平滑肌细胞不要培养至满汇合。
