兔气管上皮细胞

兔气管上皮细胞

采用Ⅱ型胶原酶联合 Dispase 对新西兰大白兔的气管上皮细胞进行原代消化分离，经密度梯度离心纯化后接种于明胶预包被的培养皿中，使用 Keratinocyte-SFM 培养基（含 EGF 和 B27 添加剂）在 37°C、5% CO₂ 条件下培养；通过免疫荧光染色检测角蛋白（Keratin）5/8、细胞角蛋白 14（KRT14）及 E-cadherin 等上皮细胞特异性标志物表达，结合倒置显微镜观察细胞贴壁后呈铺路石样多边形 morphology 特征，并经 RT-qPCR 验证上皮标志基因表达水平

产品名称：兔气管上皮细胞

英文名称： Rabbit Tracheal Epithelial Cells

组织来源： 气管

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔气管上皮细胞采用链霉蛋白酶-中性蛋白酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔气管上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 兔气管上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔气管上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

取出细胞培养瓶，置于倒置显微镜下观察细胞汇合度，待细胞达到 80%‑85% 汇合度时进行传代操作，确认细胞形态正常、无杂菌污染，弃去瓶内旧培养基。

加入无菌 PBS 缓冲液轻柔漂洗细胞瓶内壁 2 次，缓慢晃动培养瓶，洗去残留血清代谢产物，漂洗完毕后彻底吸除全部 PBS 液体。

加入预热的胰蛋白酶‑EDTA 消化液，覆盖细胞贴壁层，放入 37℃、5% CO₂培养箱进行消化，计时 2‑4min，显微镜下观察细胞皱缩变圆、细胞间隙散开，立刻终止消化。

加入等量含胎牛血清的完全培养基中和胰酶消化活性，使用无菌移液管缓慢轻柔吹打瓶壁贴壁细胞，反复吹打瓶底各个区域，使细胞充分脱落制备单细胞悬液，避免过度吹打损伤上皮细胞。

将细胞悬液转移至无菌离心管，设置离心参数 1000r/min，离心 5min，离心结束后小心吸弃上层上清液，不要触碰底部细胞沉淀。

加入新鲜预热完全培养基重悬底部细胞沉淀，轻柔吹打混匀，进行细胞计数，按照合适接种密度分装至新的细胞培养瓶 / 培养板中。

将培养瓶放平，轻柔前后左右晃动使细胞分布均匀，放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱培养，24h 后观察细胞贴壁状态，后续每 2‑3 天更换新鲜完全培养基。

1.手术获取组织后需立即在显微镜下剥离平滑肌层，避免成纤维细胞等杂细胞过度污染。

2.使用0.1%明胶包被培养皿可改善平滑肌细胞贴壁效率，尤其在原代培养初期效果显著。

3.该细胞体外传代能力较强，建议3-5代内使用，过高代次可能导致收缩表型标志物表达下降。

4.培养基中补充10%FBS和0.1uM苯肾上腺素可维持平滑肌细胞收缩表型相关蛋白表达。

5.培养期间每48小时换液，若发现细胞由梭形变为多角形可能提示表型转换，需调整实验时间窗。