产品名称 | 兔气管软骨细胞 | 组织来源 | 气管组织 |
英文名称 | Rabbit Tracheal Chondrocytes | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3826 |
方法简介 实验室分离的兔气管软骨细胞采用中性蛋白酶-胶原酶联合消化法制备而来。
质量检测 实验室分离的兔气管软骨细胞经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 兔气管软骨细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每3-4天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔气管软骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，取胫骨/股骨/关节软骨等组织
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、FBS、PBS
分离纯化步骤
取实验动物目标骨组织或软骨组织，仔细去除软组织包膜
骨组织：剪碎后用0.25%胰蛋白酶消化20分钟，再加入II型胶原酶消化60-90分钟
软骨组织：剪碎后直接用II型胶原酶37度振荡消化4-6小时
消化液经70um和40um滤网过滤，400g离心10分钟收集细胞
原代培养要点
成骨细胞：使用DMEM+10%FBS培养基，37度、5% CO2培养，细胞呈多角形贴壁
软骨细胞：使用DMEM/F12+10%FBS+10ng/mL TGF-beta3培养基，可悬浮或三维培养
成骨细胞培养14-21天后可检测到ALP活性和矿化结节形成
软骨细胞传代后易去分化，建议采用低传代次数(2-3代)或三维球状培养维持表型
常见问题优化
骨细胞得率低：延长胶原酶消化时间至90分钟，或采用两次消化法
软骨细胞去分化：采用高浓度悬浮培养(1x10^5 cells/mL)维持软骨表型
成骨细胞污染：采用差速贴壁法或免疫磁珠分选提高成骨细胞纯度
大鼠分拣蛋白1(SORT1)elisa试剂盒 | HMCB黑素瘤 |
大鼠超氧化物歧化酶2(SOD2)elisa试剂盒 | 兔脊髓成纤维细胞 |
大鼠超氧化物歧化酶(SOD)elisa试剂盒 | 兔内皮祖细胞 |
大鼠细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS-1)elisa试剂盒 | 大鼠子宫颈上皮细胞 |
大鼠UDP-N-乙酰基葡萄糖胺(UDP-GlcNAc)elisa试剂盒 | 人子宫内膜癌细胞HEC-1-A(STR鉴定正确) |
大鼠UDP葡糖醛酸基转移酶1家族多肽A1(UGT1A1)elisa试剂盒 | 大鼠肺大动脉外膜成纤维细胞 |
猪脑型肌酸激酶（CKB）elisa试剂盒 | 人原代皮脂腺细胞 |
NCI-H3122人非小肺癌 细胞专用培养基 | HEXD基因过表达细胞株 |
MGC-803人胃癌细胞专用培养基 | CATSPER4基因过表达细胞株 |
小鼠原代膀胱基质成纤维细胞专用培养基 | ZNF711基因过表达细胞株 |
兔原代骨细胞专用培养基 | CD180基因过表达细胞株 |
人原代心肌成纤维细胞专用培养基 | CREB5基因过表达细胞株 |
兔气管软骨细胞RPMI8226细胞专用培养基 | GABRA2基因过表达细胞株 |
狗原代气管上皮细胞专用培养基 | C19orf67基因过表达细胞株 |
步骤一：软骨细胞专属无菌准备 软骨细胞代谢慢、耐受性弱，实验前深度无菌消杀，耗材无热源无菌处理。提前预热软骨细胞专用培养基、无菌PBS、0.2%Ⅱ型胶原酶消化液，准备包被培养瓶，全程低温、温和、无菌操作。
步骤二：兔气管软骨组织取材 无菌摘取家兔气管，精准分离气管环状软骨组织，剔除软骨表面附着的平滑肌、结缔组织、血管与黏膜组织，保留纯净透明软骨组织，预冷PBS反复漂洗去除杂质与血污。
步骤三：超细剪切与软骨组织净化 将软骨组织剪碎至0.5mm³超细坚硬组织块，移入离心管，PBS多次轻柔漂洗，彻底清除表面软组织碎屑、血细胞，高度纯化软骨组织样本。
步骤四：长时间恒温酶解消化 加入预热Ⅱ型胶原酶消化液，37℃水浴恒温消化45min，每10min轻柔混匀一次，特异性降解软骨基质，充分解离软骨细胞，适配坚硬软骨组织的消化需求。
步骤五：终止消化与精细过滤 消化完成后加入软骨专用培养基终止反应，轻柔吹打释放软骨细胞。200目细胞筛过滤，去除未消化软骨残块，收集纯净软骨细胞悬液。
步骤六：低速离心与轻柔重悬 900r/min低速离心9min，温和富集软骨细胞沉淀，吸弃上清后加入新鲜培养基，轻柔吹打重悬，避免细胞破损，保留细胞活性。
步骤七：接种与慢增殖培养 将细胞悬液接种至培养瓶，补足培养基摇匀，置于37℃、5%CO₂培养箱静置培养。软骨细胞生长缓慢，72h静置贴壁，每3天更换一次新鲜培养基，长期观察细胞形态与增殖状态。
