产品名称 | 兔脐静脉平滑肌细胞 | 组织来源 | 脐带组织 |
英文名称 | Rabbit Umbilical Vein Smooth Muscle Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3797 |
方法简介 实验室分离的兔脐静脉平滑肌细胞采用胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的兔脐静脉平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 兔脐静脉平滑肌细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔脐静脉平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，组织取材需保持血管/器官完整性
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、平滑肌细胞专用培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织(血管/器官平滑肌层)，用预冷PBS反复冲洗去除血液
仔细分离去除外膜和黏膜层，仅保留平滑肌层组织，剪碎至1-2mm3
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合液，37度消化40-60分钟，期间振荡2-3次
消化完成后过滤(70um+40um)，300g离心10分钟收集细胞沉淀
细胞悬液接种于培养皿中，采用差速贴壁法24小时后换液去除非贴壁细胞
原代培养要点
平滑肌细胞贴壁能力较强，接种后24-48小时可见贴壁细胞呈梭形生长
使用含20%FBS的DMEM/F12完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时进行传代
平滑肌细胞传代时使用0.25%胰蛋白酶消化5-10分钟，离心收集后重新接种
常见问题优化
细胞纯度不高：可采用药物筛选法(5-氟尿嘧啶20uM处理48小时去除非平滑肌细胞)
平滑肌细胞表型转换：控制传代次数在5代以内，培养基中保持适当FBS浓度(10-20%)
细胞生长缓慢：添加10ng/mL PDGF-BB可促进平滑肌细胞增殖
大鼠含硬化蛋白域蛋白1(SOSTDC1)elisa试剂盒 | DH82狗肾恶性组织细胞 |
大鼠胞外超氧化物歧化酶3(SOD3)elisa试剂盒 | 兔骨髓巨噬细胞 |
大鼠超氧化物歧化酶2(SOD2)elisa试剂盒 | 兔脂肪干细胞 |
大鼠线粒体超氧化物歧化酶(SOD)elisa试剂盒 | 人肝动脉平滑肌细胞 |
大鼠T-细胞激活连接蛋白(LAT)elisa试剂盒 | 人慢性髓系白血病细胞扎转染荧光素酶K562+LUC(STR鉴定正确) |
大鼠UDP-N-乙酰基葡萄糖胺(UDP-GlcNAc)elisa试剂盒 | 兔胃成纤维细胞 |
猪内毒素（ET）elisa试剂盒 | 大鼠原代脊髓微血管周细胞 |
NCI-H358人非小肺癌 细胞专用培养基 | FCHSD2基因过表达细胞株 |
MG63人骨肉瘤细胞专用培养基 | GAL3ST1基因过表达细胞株 |
兔原代膀胱平滑肌细胞专用培养基 | ZXDA基因过表达细胞株 |
猪原代卵巢内膜细胞专用培养基 | LPO基因过表达细胞株 |
人原代心脏微血管内皮细胞专用培养基 | SANBR基因过表达细胞株 |
兔脐静脉平滑肌细胞RPMI-1640无糖培养基 | PHEX基因过表达细胞株 |
人原代骨关节炎软骨细胞专用培养基 | DGKE基因过表达细胞株 |
步骤一：无菌实验体系搭建实验前完成所有设备、台面、耗材的无菌消杀与烘干处理，预热脐静脉平滑肌专用培养基、无菌PBS、0.125%胰酶消化液，校准培养箱温湿度与气体浓度，保障实验全程无菌稳定。
步骤二：脐静脉平滑肌组织纯化取材 无菌分离兔脐静脉血管，小心剔除血管内膜、外膜所有杂质组织，仅保留血管中膜平滑肌组织，预冷PBS反复漂洗，去除血污、碎屑与残留杂质，获得纯净靶组织。
步骤三：组织剪切与杂质清除 将纯化后的平滑肌组织均匀剪碎至1mm³组织块，移入离心管，PBS反复漂洗3次，静置弃除上清，彻底清除组织间隙残留血细胞与破碎细胞。
步骤四：恒温精准酶解消化 加入预热胰酶消化液，37℃水浴恒温消化23min，每5min颠倒混匀一次，充分降解细胞间基质，实现平滑肌细胞高效解离，保证细胞活性与收获量。
步骤五：终止消化与过滤纯化 消化结束后加入完全培养基终止反应，轻柔吹打释放解离细胞。100目细胞筛过滤混合液，去除组织残块，收集纯净脐静脉平滑肌细胞悬液。
步骤六：离心富集与细胞重悬 1000r/min离心10min，富集管底细胞沉淀，吸弃上清废液，加入2mL预热专用培养基，轻柔吹打重悬，制备均匀单细胞悬液。
步骤七：接种培养与日常观测 细胞悬液接种至培养瓶，补足培养基摇匀，置于37℃、5%CO₂培养箱静置培养。24h贴壁后正常生长，每48h换液一次，定期观察细胞增殖与形态变化。
