产品名称 | 兔脐静脉内皮细胞 | 组织来源 | 脐带组织 |
英文名称 | Rabbit Umbilical Vein Endothelial Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2828 |
方法简介 实验室分离的兔脐静脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔脐静脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）
培养基： 兔脐静脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔脐静脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，每只可获得2-5x10^5个内皮细胞，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、兔抗细胞CD31抗体(用于流式分选)、ECM基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标血管/组织，用预冷PBS冲洗去除血液，仔细分离去除外膜和脂肪组织
将组织剪碎后加入0.25%胰蛋白酶，37度消化15-20分钟，收集消化液
再加入II型胶原酶，37度振荡消化45-60分钟，充分分散组织
消化液经70um和40um滤网依次过滤，300g离心10分钟收集细胞
用含CD31抗体的磁珠进行阳性/阴性分选，或采用差速贴壁法去除成纤维细胞，收集CD31+内皮细胞
原代培养要点
将纯化后的内皮细胞接种于明胶预包被的培养皿中，使用ECM基质胶包被可显著提高贴壁率
接种密度建议3x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养，内皮细胞通常24-72小时贴壁
使用内皮细胞专用培养基(含20%FBS、EGF 5ng/mL、FGF 2ng/mL、肝素10ug/mL)
每2-3天换液一次，细胞融合至80-90%时可用0.05%胰蛋白酶-EDTA传代
常见问题优化
内皮细胞被成纤维细胞污染：采用差速贴壁法2-3次，或CD31磁珠分选提高纯度
内皮细胞凋亡：培养基中添加ROCK抑制剂Y-27632(10uM)可显著提高存活率
表达内皮标志物下降：传代次数控制在3代以内，冻存早期细胞以备后续使用
大鼠琥珀酸氧化酶(SOX)elisa试剂盒 | GM15850共济失调 |
大鼠分拣蛋白1(SORT1)elisa试剂盒 | 兔骨髓单核细胞 |
大鼠胞外铜锌超氧化物歧化酶(SOD3)elisa试剂盒 | 兔毛囊角质细胞 |
大鼠超氧化物歧化酶(SOD)elisa试剂盒 | 大鼠结肠平滑肌细胞 |
大鼠T-细胞核因子3(NFATC3)elisa试剂盒 | 人B细胞淋巴瘤SU-DHL-8 (STR鉴定正确) |
大鼠UDP-N-乙酰氨基葡萄糖肽N-乙酰葡糖氨基转移酶110kDa亚基(OGT)elisa试剂盒 | 兔食管上皮细胞 |
猪内分泌腺来源血管内皮生长因子（EG-VEGF）elisa试剂盒 | 兔原代精原细胞 |
NCI-H295R人肾上腺皮质细腺癌细胞专用培养基 | ZNF473基因过表达细胞株 |
MG63人骨肉瘤细胞专用培养基 | BCLAF3基因过表达细胞株 |
兔原代膀胱基质成纤维细胞专用培养基 | UTP25基因过表达细胞株 |
人原代脑血管外膜成纤维细胞专用培养基 | GOLGA6L6基因过表达细胞株 |
人原代心脏微血管周细胞专用培养基 | GALNTL5基因过表达细胞株 |
兔脐静脉内皮细胞RPMI-1640（NaHCO31.5g/L）培养基 | DDN基因过表达细胞株 |
小鼠原代子宫内膜干细胞专用培养基 | EBF4基因过表达细胞株 |
步骤一：内皮细胞无菌精细准备 深度消杀超净台，所有耗材无菌无杂质，提前预热脐静脉内皮专用培养基、无菌PBS、温和胶原酶消化液，准备包被培养瓶与精细细胞筛，全程轻柔无菌操作，保护内皮细胞活性。
步骤二：兔脐静脉组织精准分离 无菌摘取兔脐带，在体视显微镜下分离纯净脐静脉血管，剔除脐动脉、脐带间质及外膜杂质组织，纵向剪开血管，暴露内膜内皮层，预冷PBS漂洗洁净。
步骤三：内膜组织预处理净化 将脐静脉内膜组织剪成细小片段，移入无菌离心管，PBS温和漂洗3次，清除内腔残留血细胞、黏液杂质，彻底净化内膜组织样本。
步骤四：温和特异性酶解消化 加入预热胶原酶消化液，37℃水浴避光温和消化16-18min，每3min轻微晃动一次，精准解离脐静脉内皮细胞，不损伤基底组织。
步骤五：终止消化与精细过滤 加入内皮专用培养基快速终止消化，轻柔吹打内膜组织洗脱细胞，200目细胞筛过滤，去除组织残片，收集纯净脐静脉内皮细胞悬液。
步骤六：低速离心与活性重悬 800r/min低速离心8min，低损伤富集细胞，吸弃上清后加入新鲜预热培养基，轻柔吹打重悬，制备均匀单细胞悬液。
步骤七：接种贴壁与形态培养 将细胞悬液接种于包被培养瓶，补足培养基静置，放入37℃、5%CO₂培养箱培养。48h禁止移动，待细胞贴壁伸展后，每2天换液，观察典型内皮铺路石样形态。
