兔脐动脉平滑肌细胞

兔脐动脉平滑肌细胞

基于酶消化-差速贴壁联合策略从新西兰大白兔脐动脉平滑肌细胞组织获取平滑肌细胞，经 0.1% 胶原酶 IV 消化 2h 后通过 30% 胎牛血清梯度贴壁纯化，接种于纤连蛋白包被培养皿中，使用 DMEM 高糖培养基（含 15% FBS、10 ng/mL EGF 及 50 μg/mL 抗坏血酸）培养；通过免疫荧光双标检测 α-SMA/SM-MHC 共表达，RT-qPCR 分析平滑肌分化标志基因转录水平，并观察细胞在收缩刺激下的形态变化。

产品名称：兔脐动脉平滑肌细胞

英文名称： Rabbit Umbilical Artery Smooth Muscle Cells

组织来源： 脐带组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔脐动脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的兔脐动脉平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  兔脐动脉平滑肌细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔脐动脉平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

步骤一：标准化无菌术前准备 全面消杀实验台面与器具，耗材无菌烘干备用。预热脐动脉平滑肌专用培养基、无菌PBS、0.125%胰酶消化液，校准细胞培养箱参数，搭建无菌、恒温、洁净的实验操作环境。

步骤二：脐动脉平滑肌组织取材 无菌分离兔脐动脉血管，剔除血管内膜内皮组织、外膜结缔组织与脂肪组织，精准保留血管中膜平滑肌层组织，预冷PBS反复漂洗，清除血污与杂质，纯化靶组织。

步骤三：剪切组织与多次净化 将平滑肌组织剪碎至1mm³细小组织块，移入离心管，PBS轻柔吹打漂洗3次，静置弃上清，彻底清除组织间隙血细胞与碎屑，保证样本纯净。

步骤四：恒温胰酶充分消化 加入预热胰酶消化液，37℃水浴消化22min，每5min混匀一次，充分降解平滑肌细胞间连接结构，促使细胞高效解离。

步骤五：终止消化与过滤除杂 消化完成后加入完全培养基终止反应，轻柔吹打释放细胞。100目细胞筛过滤混合液，截留组织残块，收集纯净脐动脉平滑肌细胞悬液。

步骤六：离心富集与细胞重悬 1000r/min室温离心10min，富集细胞沉淀，吸弃上清废液，加入2mL预热专用培养基，轻柔吹打重悬，分散细胞团块。

步骤七：接种与常规稳态培养 细胞悬液接种至培养瓶，补足培养基摇匀，放入37℃、5%CO₂培养箱静置培养。24h贴壁稳定，每48h更换新鲜培养基，观察细胞梭形增殖形态。

1.目标组织取材后迅速置于含青霉素-链霉素的Hanks液中运输，尽快分离平滑肌组织块。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.平滑肌细胞增殖速度中等，约3-4天换液一次，融合后呈峰谷状排列(蜂窝样)为典型特征。

4.培养基中添加20%胎牛血清和10ng/ml血小板衍生生长因子(PDGF)可显著促进平滑肌细胞增殖。

5.细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。