产品名称 | 兔脐动脉内皮细胞 | 组织来源 | 脐带组织 |
英文名称 | Rabbit Umbilical Artery Endothelial Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3808 |
方法简介 实验室分离的兔脐动脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔脐动脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）
培养基： 兔脐动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔脐动脉内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，每只可获得2-5x10^5个内皮细胞，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、兔抗细胞CD31抗体(用于流式分选)、ECM基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标血管/组织，用预冷PBS冲洗去除血液，仔细分离去除外膜和脂肪组织
将组织剪碎后加入0.25%胰蛋白酶，37度消化15-20分钟，收集消化液
再加入II型胶原酶，37度振荡消化45-60分钟，充分分散组织
消化液经70um和40um滤网依次过滤，300g离心10分钟收集细胞
用含CD31抗体的磁珠进行阳性/阴性分选，或采用差速贴壁法去除成纤维细胞，收集CD31+内皮细胞
原代培养要点
将纯化后的内皮细胞接种于明胶预包被的培养皿中，使用ECM基质胶包被可显著提高贴壁率
接种密度建议3x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养，内皮细胞通常24-72小时贴壁
使用内皮细胞专用培养基(含20%FBS、EGF 5ng/mL、FGF 2ng/mL、肝素10ug/mL)
每2-3天换液一次，细胞融合至80-90%时可用0.05%胰蛋白酶-EDTA传代
常见问题优化
内皮细胞被成纤维细胞污染：采用差速贴壁法2-3次，或CD31磁珠分选提高纯度
内皮细胞凋亡：培养基中添加ROCK抑制剂Y-27632(10uM)可显著提高存活率
表达内皮标志物下降：传代次数控制在3代以内，冻存早期细胞以备后续使用
大鼠性别决定区Y框蛋白2(SOX-2)elisa试剂盒 | NTERA-2 cl.D1睾丸癌 |
大鼠含硬化蛋白域蛋白1(SOSTDC1)elisa试剂盒 | 兔淋巴管内皮细胞 |
大鼠分拣蛋白1(SORT1)elisa试剂盒 | 兔脂肪微血管内皮细胞 |
大鼠超氧化物歧化酶2(SOD2)elisa试剂盒 | 兔羊膜间质细胞 |
大鼠Toll样受体9(TLR9)elisa试剂盒 | 小鼠乳腺癌细胞AT-3（种属鉴定） |
大鼠T-细胞核因子3(NFATC3)elisa试剂盒 | 猪成骨细胞 |
猪内皮型一氧化氮合酶（eNOS）elisa试剂盒 | 小鼠原代骨骼肌微血管内皮细胞 |
NCI-H292人肺癌(淋巴结转移)细胞专用培养基 | TTLL10基因过表达细胞株 |
MET-5A人膜间皮细胞专用培养基 | SLC26A1基因过表达细胞株 |
大鼠原代心房心肌细胞专用培养基 | TRIM42基因过表达细胞株 |
小鼠原代脑皮层神经元细胞专用培养基 | ENOX1基因过表达细胞株 |
人原代胸腺成纤维细胞专用培养基 | ZNF606基因过表达细胞株 |
兔脐动脉内皮细胞RM-1+luc细胞专用培养基 | GOLGA8H基因过表达细胞株 |
大鼠原代DRG神经元细胞专用培养基 | BMP8A基因过表达细胞株 |
步骤一：内皮细胞无菌实验准备 提前完成超净台无菌消杀，耗材高压灭菌烘干。预热脐动脉内皮专用培养基、无菌PBS、0.1%胶原酶温和消化液，准备明胶包被培养瓶、精细细胞筛，全程温和无菌操作，保护脆弱内皮细胞。
步骤二：兔脐动脉组织分离取材 无菌取兔脐带组织，在体视显微镜下精准分离脐动脉血管，剔除脐带静脉、间质组织及外膜结缔组织，保留完整纯净的脐动脉血管，预冷PBS反复漂洗去除血污与杂质。
步骤三：组织预处理与净化漂洗 将脐动脉血管纵向剪开，暴露血管内膜内皮层面，剪成1cm左右小段，移入离心管，PBS轻柔漂洗3次，清除血管内腔残留血细胞与杂质，纯化内膜组织。
步骤四：内膜温和酶解消化 加入预热胶原酶消化液，浸没血管内膜组织，37℃水浴温和消化18min，每4min轻柔晃动一次，特异性解离血管内膜内皮细胞，避免损伤血管肌层组织。
步骤五：终止消化与细胞过滤 立即加入内皮专用培养基终止消化，轻柔吹打血管内壁，充分洗脱解离的内皮细胞。200目细胞筛过滤，去除组织残片，收集纯净脐动脉内皮细胞悬液。
步骤六：低速离心与轻柔重悬 800r/min低速离心8min，富集内皮细胞沉淀，吸弃上清后加入1.5mL预热培养基，轻柔吹打重悬，制备均匀单细胞悬液。
步骤七：接种贴壁与专属培养 细胞悬液接种于明胶包被培养瓶，补足培养基摇匀，置于37℃、5%CO₂培养箱静置培养。48h静置贴壁，每2天换液一次，观察内皮细胞多边形铺路石样形态。
