兔脐带间充质干细胞

兔脐带间充质干细胞

基于胶原酶消化-密度梯度离心联合策略从新西兰大白兔脐带间充质干细胞组织获取干细胞组分，经差速贴壁纯化后接种于明胶包被培养皿中，使用含多种生长因子（bFGF 10 ng/mL、EGF 20 ng/mL 及 PDGF）的干细胞专用培养基培养；通过 RT-qPCR 检测 Oct4、Nanog、Sox2、KLF4 等多能性基因转录水平，免疫荧光显示 SSEA-1/TRA-1-60 抗原表达，并结合 colony-forming unit assay 评估克隆形成能力。

产品名称：兔脐带间充质干细胞

英文名称： Rabbit Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells

组织来源： 脐带组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔脐带间充质干细胞采用组织贴块法制备而来。

质量检测  实验室分离的兔脐带间充质干细胞经CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  兔脐带间充质干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3-5代左右

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔脐带间充质干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

步骤一：干细胞高标准无菌准备 干细胞培养要求极高，实验前彻底消杀超净台与生物安全柜，所有耗材无菌无酶、无热源。提前预热干细胞专用完全培养基、无菌PBS、0.1%胶原酶消化液，调试培养箱标准参数，全程无菌、恒温、无杂质操作。

步骤二：兔脐带组织无菌取材处理 无菌摘取新生兔完整脐带组织，立即移入预冷无菌PBS中，反复漂洗清除脐带表面血污、黏液与杂质，剔除脐带两端破损组织，保留完整、新鲜的脐带间质组织。

步骤三：组织剥离与精细剪切 无菌条件下剥离脐带血管组织，保留脐带华通氏胶间质组织，将纯化的间质组织剪碎至1mm³均匀组织块，PBS反复漂洗3次，彻底清除残留血管碎屑与杂质。

步骤四：恒温胶原酶特异性消化 加入4mL预热37℃的Ⅰ型胶原酶消化液，完全浸没组织块，37℃水浴恒温消化40min，每8min混匀一次，特异性降解间质基质，高效解离间充质干细胞。

步骤五：终止消化与过滤纯化 消化完成后加入干细胞完全培养基终止反应，轻柔吹打释放干细胞。100目细胞筛过滤混合液，去除未消化组织残块，收集纯净干细胞悬液。

步骤六：离心富集与细胞重悬 1000r/min离心10min，富集干细胞沉淀，吸弃上清废液，加入2mL预热专用培养基，轻柔吹打重悬，制备均匀活性干细胞悬液。

步骤七：接种与干细胞稳态培养 将细胞悬液接种至培养瓶，补足培养基摇匀，置于37℃、5%CO₂培养箱静置培养。24h贴壁后观察干细胞梭形形态，每3天更换新鲜培养基，维持干细胞干性与增殖活性。

1.取材时需仔细去除血管或器官表面的脂肪组织和结缔组织，仅保留平滑肌层，操作时间控制在20分钟以内。

2.常规培养皿经PBS冲洗后即可使用，平滑肌细胞具有较强的自主贴壁能力。

3.平滑肌细胞体外可增殖，传代比例1:3至1:4，细胞长至80-90%融合时进行胰酶消化传代。

4.在DMEM培养基中补充10-20%FBS及1%青霉素-链霉素即可满足生长需求，必要时添加10ng/ml EGF。

5.换液时每2-3天更换一次新鲜培养基，注意观察细胞形态变化，收缩型细胞呈梭形峰谷状排列。