免疫组化试剂盒（抗兔 ）

DAB染色试剂盒（聚合物法）说明书

【产品名称】

通用名称：DAB染色试剂盒（聚合物法)

商品名称：免疫组化试剂盒（抗兔二抗）

货号：OST9868K

【包装规格】

60 测试/盒    180测试/盒   500测试/盒

【预期用途】

本试剂盒为两步法聚合物‑HRP免疫组化检测系统，用于福尔马林固定石蜡包埋组织切片、细胞爬片的免疫组织化学显色。HRP催化DAB底物，在抗原位点生成不溶于酒精的棕褐色沉淀，光学显微镜观察阳性信号 。

【检测原理】

石蜡切片经脱蜡水化、抗原修复，试剂1阻断组织内源性过氧化物酶；加入一抗特异性结合靶抗原；试剂2为HRP标记的高分子聚合物二抗，直接结合一抗，无需生物素‑链霉亲和素，规避组织内源性生物素干扰；DAB色原在HRP催化下氧化，形成棕褐色不溶性沉淀，完成信号显色 。

【主要组成成份】

【储存条件与有效期】

1. 全部试剂2～8℃避光保存，严禁冷冻；冷冻会造成聚合物二抗失活、DAB失效。

2. 有效期：12个月（见瓶身/外盒批号、效期）。

3. DAB工作液必须现配现用，避光，1小时内用完，出现沉淀弃掉不要使用。

 【操作步骤（石蜡切片）】

  全程使用湿盒孵育，切片组织严禁干片。

1.脱蜡

二甲苯Ⅰ 10 min → 二甲苯Ⅱ 10 min；无水乙醇 3 min×2；95%乙醇3 min；85%乙醇3 min；75%乙醇3 min；蒸馏水洗，PBS浸泡。

2.抗原修复（按一抗要求选择）

柠檬酸钠修复液（pH 6.0）高温煮沸修复20 min，修复完毕，修复液中自然冷却至室温；PBS冲洗3 min×3次。

3.阻断内源性过氧化物酶

甩干切片，组化笔沿组织画圈，滴加1号试剂过氧化物酶封闭液完全覆盖组织；室温孵育10 min；PBS冲洗3 min×3次。

4.滴加一抗

吸干切片周围多余液体（组织保持湿润），滴加稀释好的一抗100ul；37℃孵育30 min-1h；孵育结束，PBS冲洗3 min×3次。

5.滴加 HRP聚合物二抗

甩掉PBS，滴加2号试剂（HRP聚合物二抗）100ul完全覆盖组织；室温/37℃湿盒孵育20-30 min；PBS冲洗3 min×3次。

6.DAB配制/显色

配制方法：以1ml显色液为例：在DAB配制瓶中依次加入1mlDAB底物缓冲液（3号试剂），50ulDAB浓缩液(4号试剂）后混匀。

根据组织大小滴加1-2滴在组织上，直至完全覆盖组织，通常为50-100ul，室温显色5 min，显微镜下实时观察，阳性信号呈棕褐色，达到理想染色强度，立即用蒸馏水充分冲洗切片终止显色。

7.木素复染-脱水-透明-封片。

⚠️【安全警示】

1.DAB属于可疑致癌物；全程佩戴手套、实验服，避免皮肤黏膜直接接触；如接触立刻大量清水冲洗。

2.DAB废液、接触DAB的枪头、切片，按实验室危险废弃物收集处理，不要直接倒入下水道

3.试剂避免皮肤、眼睛接触；一旦溅入眼睛，大量清水冲洗并就医。

4.试剂出现浑浊、沉淀、变色，禁止使用。

【需要自备试剂耗材】

   PBS/TBS缓冲液、二甲苯、梯度乙醇、苏木素染液、中性树胶封片剂；免疫组化笔；湿盒；移液器；显微镜；染色架。

【注意事项】

1.本产品仅供科研实验室专业人员使用，不能用于人体体外诊断、临床检测。

2.不同批次之间性能经过质控验证；建议同一项目尽量使用同一批次试剂盒。

3.操作全程避免试剂冻融；HRP聚合物严禁冻存。

4.本试剂盒仅用于免疫组化染色