兔膀胱移行上皮细胞

兔膀胱移行上皮细胞

采用Ⅱ型胶原酶联合 Dispase 对新西兰大白兔的膀胱移行上皮细胞进行原代消化分离，经密度梯度离心纯化后接种于明胶预包被的培养皿中，使用 Keratinocyte-SFM 培养基（含 EGF 和 B27 添加剂）在 37°C、5% CO₂ 条件下培养；通过免疫荧光染色检测角蛋白（Keratin）5/8、细胞角蛋白 14（KRT14）及 E-cadherin 等上皮细胞特异性标志物表达，结合倒置显微镜观察细胞贴壁后呈铺路石样多边形 morphology 特征，并经 RT-qPCR 验证上皮标志基因表达水平⁠⁠

产品名称：兔膀胱移行上皮细胞

英文名称： Rabbit Bladder Transitional Epithelial Cells

组织来源： 膀胱组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔膀胱移行上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔膀胱移行上皮细胞经Cytokeratin-AE1/AE3免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 兔膀胱移行上皮细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔膀胱移行上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

步骤一：高要求无菌实验准备 移行上皮细胞敏感度高、易污染，实验前40min深度消杀超净台，所有耗材无菌烘干。提前预热上皮细胞专用培养基、无菌PBS、0.1%胰酶-胶原酶温和消化液，准备包被培养瓶与精细细胞筛，全程严格无菌、温和操作。

步骤二：膀胱移行上皮组织取材 无菌取家兔膀胱，用无菌PBS彻底冲洗内腔，清除尿液残留与污物，轻柔刮取膀胱内壁完整移行上皮黏膜组织，避免夹带平滑肌肌层组织，快速将上皮组织移入预冷PBS中漂洗洁净。

步骤三：轻柔剪切与组织净化 将上皮组织轻柔剪碎至0.8mm³细小组织块，避免机械碾压损伤上皮细胞。移入离心管，PBS温和漂洗3次，静置弃上清，清除游离杂质与血细胞，纯化上皮组织样本。

步骤四：温和恒温酶解消化 加入温和复合消化液，37℃水浴避光消化20min，每4min轻柔混匀一次，温和降解上皮细胞间连接，促使细胞解离，杜绝过度消化导致上皮细胞失活、破损。

步骤五：终止消化与精细过滤 立即加入上皮专用培养基终止消化，轻柔吹打释放细胞。采用200目细胞筛过滤，去除组织残片，收集纯净的膀胱移行上皮细胞悬液，保证细胞纯度与完整性。

步骤六：低速离心与轻柔重悬 800r/min低速离心8min，减少上皮细胞损伤，富集细胞沉淀后吸弃上清，加入1.5mL预热培养基，极轻柔吹打重悬，制备均匀单细胞悬液。

步骤七：接种贴壁与上皮专属培养 将细胞悬液接种于包被培养瓶，补足培养基，十字摇匀后置于37℃、5%CO₂培养箱静置培养。48h禁止移动，待细胞贴壁伸展后，每2天换液一次，观察上皮细胞多边形形态与抱团生长特性。

1.取材过程需严格无菌操作，组织块用PBS冲洗3次以上以去除血液残留，减少培养污染风险。

2.使用未包被的常规培养瓶即可，成纤维细胞贴壁能力强，一般在24小时内即可见细胞从组织块边缘迁出。

3.长期培养中需定期检测细胞标志物表达，确保细胞身份和纯度不受影响。

4.培养基中补充10%FBS和1%青霉素-链霉素，必要时可添加1ng/ml EGF促进细胞增殖。

5.培养期间注意观察是否有成纤维细胞过度生长压制其他细胞类型的情况，必要时使用选择性培养基。