产品名称 | 兔膀胱成纤维细胞 | 组织来源 | 膀胱组织 |
英文名称 | Rabbit Bladder Fibroblasts | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2764 |
方法简介 实验室分离的兔膀胱成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的兔膀胱成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 兔膀胱成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔膀胱成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，取健康组织块约0.5-1g
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质
剪碎组织至1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶，37度消化30-40分钟
加入II型胶原酶继续消化30分钟，胎牛血清终止消化
经70um和40um滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
重悬细胞后接种于未包被培养皿中，37度培养24小时后换液去除悬浮细胞
原代培养要点
成纤维细胞贴壁能力强，接种后12-24小时大部分细胞贴壁，呈梭形或星形
使用DMEM/F12+10%FBS完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时可用0.25%胰蛋白酶消化传代
原代成纤维细胞增殖较快，通常7-14天可达融合状态
常见问题优化
成纤维细胞生长过快：适当降低FBS浓度至5-10%可减缓生长速度
细胞老化：控制传代次数在10代以内，早期代次实验结果更可靠
交叉污染：严格无菌操作，注意区分成纤维细胞与肌成纤维细胞表型
大鼠精子顶体膜结合蛋白1(SPACA1)elisa试剂盒 | NCI-H1666肺支气管癌 |
大鼠特异性蛋白1(Sp1)elisa试剂盒 | 兔骨骼肌成纤维细胞 |
大鼠性别决定区Y框蛋白9(SOX-9)elisa试剂盒 | 兔卵巢颗粒细胞 |
大鼠性别决定区Y框蛋白10(SOX-10)elisa试剂盒 | 人肠静脉内皮细胞 |
大鼠Tau蛋白(Tau)elisa试剂盒 | 人食管癌细胞TE-10(STR鉴定正确) |
大鼠TH糖蛋白(TH)elisa试剂盒 | 牛瘤胃上皮细胞 |
猪鸟氨酸脱羧酶（ODC）elisa试剂盒 | 人原代真皮毛乳头细胞 |
NCI-H2228人肺癌细胞专用培养基 | ACTL6B基因过表达细胞株 |
MDA-MB-453人乳腺癌细胞专用培养基 | LDB3基因过表达细胞株 |
鸡原代骨骼肌细胞专用培养基 | GRPR基因过表达细胞株 |
大鼠原代输卵管平滑肌细胞专用培养基 | SANBR基因过表达细胞株 |
人原代牙周膜成纤维细胞专用培养基 | ADRA2C基因过表达细胞株 |
兔膀胱成纤维细胞RGC-5细胞专用培养基 | EBF4基因过表达细胞株 |
小鼠原代口腔黏膜成纤维细胞专用培养基 | TTLL10基因过表达细胞株 |
步骤一：无菌实验前期准备 全面消杀超净工作台与实验器具，所有耗材高压灭菌烘干。提前预热膀胱成纤维细胞专用完全培养基、无菌PBS缓冲液、0.25%胰酶消化液，调试培养箱温度、CO₂浓度与湿度，保证实验环境、试剂、设备全部达标，杜绝污染风险。
步骤二：兔膀胱组织取材纯化 无菌条件下摘取家兔完整膀胱组织，用无菌PBS反复冲洗膀胱内腔与外壁，清除尿液残留、血污与杂质。小心剔除膀胱黏膜层、肌层组织，仅保留膀胱外壁结缔组织，即为成纤维细胞富集组织，快速漂洗洁净备用。
步骤三：精细剪切与组织净化 将纯化的膀胱结缔组织置于无菌培养皿，剪碎至1mm³均匀组织块，移入无菌离心管，加入足量PBS缓冲液，轻柔吹打漂洗4次，每次静置弃上清，彻底清除组织碎屑、血细胞，保证样本高度纯净。
步骤四：恒温长时间酶解消化 加入4mL预热37℃的0.25%胰酶消化液，完全浸没组织块，37℃水浴恒温消化35min，每6min混匀一次，充分降解成纤维细胞外基质，促使细胞大量解离，适配成纤维细胞的组织附着特性。
步骤五：终止消化与过滤纯化 消化结束后加入等量完全培养基终止消化，轻柔吹打释放细胞。经100目细胞筛过滤混合液，去除未消化组织残片，收集纯净的膀胱成纤维细胞悬液。
步骤六：离心沉淀与细胞重悬 1000r/min离心10min，富集细胞沉淀，吸弃上清废液，加入2mL预热专用培养基，轻柔吹打重悬，彻底分散细胞团块，制备活性优良的单细胞悬液。
步骤七：接种培养与日常管护 将细胞悬液接种至培养瓶，补足培养基，摇匀后置于37℃、5%CO₂培养箱静置培养。24h贴壁稳定后，每3天更换一次新鲜培养基，观察细胞梭形形态与增殖状态，及时清理悬浮死细胞。
