产品名称 | 兔脑微血管周细胞 | 组织来源 | 大脑组织 |
英文名称 | Rabbit Brain Microvascular Pericytes | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3761 |
方法简介 实验室分离的兔脑微血管周细胞采用中性蛋白酶-胶原酶联合消化法制备而来。
质量检测 实验室分离的兔脑微血管周细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 兔脑微血管周细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔脑微血管周细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，取目标组织微血管片段
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、ECM基质胶、FBS、PBS
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷PBS冲洗去除血液
仔细分离微血管片段，剪碎后加入II型胶原酶37度消化45-60分钟
消化液经70um和40um滤网过滤，300g离心10分钟收集细胞
采用免疫磁珠分选(抗PDGFR-beta抗体)富集周细胞
原代培养要点
周细胞使用DMEM/F12+10%FBS培养基，37度、5% CO2培养
接种于纤维连接蛋白包被的培养皿中，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞呈梭形贴壁生长
常见问题优化
周细胞得率低：优化微血管分离方法，提高微血管片段纯度
内皮细胞污染：采用PDGFR-beta磁珠分选提高纯度
细胞表型维持：控制传代次数，使用低浓度血清培养
大鼠肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)elisa试剂盒 | VERO-E6非洲绿猴肾细胞 |
大鼠精子顶体膜结合蛋白1(SPACA1)elisa试剂盒 | 兔成骨细胞 |
大鼠表面活性物质关联蛋白A(SPA)elisa试剂盒 | 兔腮腺细胞 |
大鼠性别决定区Y框蛋白9(SOX-9)elisa试剂盒 | 人肠动脉内皮细胞 |
大鼠Tamm-Horsfall蛋白(THP)elisa试剂盒 | 人多发性骨髓瘤细胞MM.1S(STR鉴定正确) |
大鼠TAU-262蛋白(TAU-262)elisa试剂盒 | 人宫颈平滑肌细胞 |
猪尿素（Urea）elisa试剂盒 | 小鼠原代角膜基质细胞 |
NCI-H226人肺鳞癌细胞专用培养基 | ACCSL基因过表达细胞株 |
MDA-MB-436人乳腺癌细胞专用培养基 | UTP25基因过表达细胞株 |
大鼠原代卵巢颗粒细胞专用培养基 | CD180基因过表达细胞株 |
大鼠原代半月板纤维软骨细胞专用培养基 | ARSF基因过表达细胞株 |
人原代眼眶成纤维细胞专用培养基 | DDN基因过表达细胞株 |
兔脑微血管周细胞RENCA细胞专用培养基 | BMP8A基因过表达细胞株 |
兔原代股动脉平滑肌细胞专用培养基 | C2CD4C基因过表达细胞株 |
步骤一：专项无菌实验准备 针对周细胞培养特性，提前完成超净台深度消杀，所有耗材无菌烘干。提前预热周细胞专用完全培养基、无菌PBS、0.15%胰酶-胶原酶混合消化液，准备精细细胞筛、低吸附离心管，严格把控无菌环境，适配周细胞低耐受、高纯度的培养要求。
步骤二：脑微血管组织分离取材 无菌取家兔大脑皮层组织，剔除大血管、神经及结缔组织，收集浅表微血管丰富的脑组织片段。预冷PBS反复漂洗，清除血污与杂质，保留完整微血管网络组织，全程低温快速操作，最大程度保留周细胞活性与结构完整性。
步骤三：超细剪切与组织净化 将脑组织剪切为0.5mm³以下的超细组织碎块，移入离心管加入无菌PBS，轻柔吹打漂洗3次，每次静置沉降后弃除上清杂质，彻底清除游离血细胞、破碎细胞，纯化微血管组织样本，为周细胞解离提供纯净基质。
步骤四：梯度恒温酶解解离 加入配置好的混合消化液，37℃水浴梯度消化25min，每5min轻柔颠倒混匀，逐步降解微血管管壁基质，使附着于微血管的周细胞温和解离，避免过度消化导致周细胞脱落损伤，平衡解离效率与细胞活性。
步骤五：终止消化与细胞纯化过滤 消化结束后加入完全培养基终止反应，轻柔吹打混匀，释放解离的周细胞。通过200目细胞筛过滤，去除微血管残片、内皮细胞团等杂质，收集纯净周细胞悬液，保证细胞纯度符合培养标准。
步骤六：离心富集与轻柔重悬 900r/min室温离心9min，富集周细胞沉淀，缓慢吸弃上清废液，避免触碰管底微量细胞。加入2mL预热专用培养基，轻柔吹打重悬，充分分散细胞，制备均匀单细胞悬液，无抱团、无破损细胞。
步骤七：接种贴壁与稳态培养 将细胞悬液接种至培养瓶中，补足培养基后摇匀，置于37℃、5%CO₂培养箱静置培养。24h静置贴壁，后续每48h更换新鲜培养基，定期观察周细胞增殖、贴壁形态，及时清理死细胞，维持稳定生长环境。
