产品名称 | 兔脑膜成纤维细胞 | 组织来源 | 脑膜组织 |
英文名称 | Rabbit Meningeal Fibroblasts | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3831 |
方法简介 实验室分离的兔脑膜成纤维细胞采用混合胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的兔脑膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 兔脑膜成纤维细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3代左右；1-2代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔脑膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，取健康组织块约0.5-1g
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质
剪碎组织至1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶，37度消化30-40分钟
加入II型胶原酶继续消化30分钟，胎牛血清终止消化
经70um和40um滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
重悬细胞后接种于未包被培养皿中，37度培养24小时后换液去除悬浮细胞
原代培养要点
成纤维细胞贴壁能力强，接种后12-24小时大部分细胞贴壁，呈梭形或星形
使用DMEM/F12+10%FBS完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时可用0.25%胰蛋白酶消化传代
原代成纤维细胞增殖较快，通常7-14天可达融合状态
常见问题优化
成纤维细胞生长过快：适当降低FBS浓度至5-10%可减缓生长速度
细胞老化：控制传代次数在10代以内，早期代次实验结果更可靠
交叉污染：严格无菌操作，注意区分成纤维细胞与肌成纤维细胞表型
大鼠可溶程序性死亡分子-1(sPD-1)elisa试剂盒 | SNU-2535非小细胞肺癌 |
大鼠肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)elisa试剂盒 | 兔子宫内膜干细胞 |
大鼠精子顶体膜结合蛋白1(SPACA1)elisa试剂盒 | 兔肾上腺皮质细胞 |
大鼠特异性蛋白1(Sp1)elisa试剂盒 | 兔椎间盘纤维环细胞 |
大鼠S-亚硝基谷胱甘肽还原酶(GSNOR)elisa试剂盒 | 大鼠肝上皮样干细胞WB-F344（种属鉴定） |
大鼠Tamm-Horsfall蛋白(THP)elisa试剂盒 | 小鼠椎体终板软骨干细胞 |
猪柠檬酸合酶（CS）elisa试剂盒 | 兔原代毛囊干细胞 |
NCI-H2126人肺癌细胞专用培养基 | ACTRT1基因过表达细胞株 |
MDA-MB-435S人黑素瘤细胞专用培养基 | TRIM42基因过表达细胞株 |
大鼠原代DC细胞专用培养基 | LPO基因过表达细胞株 |
猪原代脂肪干细胞专用培养基 | CHRNB2基因过表达细胞株 |
人原代羊膜上皮细胞专用培养基 | GOLGA8H基因过表达细胞株 |
兔脑膜成纤维细胞REH细胞专用培养基 | HEXD基因过表达细胞株 |
兔原代口腔黏膜成纤维细胞专用培养基 | ADAL基因过表达细胞株 |
步骤一：术前无菌环境与耗材准备 实验前完成超净台、生物安全柜紫外消毒与台面消杀，所有手术器械、离心管、培养瓶、细胞筛均经高压灭菌处理。提前预热成纤维细胞专用完全培养基、无菌PBS缓冲液、0.25%胰酶消化液，检查试剂有效期与洁净度，全程遵循无菌操作规范，杜绝污染。
步骤二：兔脑膜组织精准取材 无菌条件下取家兔完整颅脑，小心剥离颅骨，暴露完整脑膜组织，轻柔剥离硬脑膜、蛛网膜纯净组织，避免夹带脑组织、血管及神经组织，最大程度减少杂细胞污染。快速将剥离的脑膜组织移入预冷无菌PBS中，漂洗去除表面血污与杂质，保持组织完整鲜活。
步骤三：组织剪切与多次净化漂洗 将脑膜组织置于无菌培养皿，用无菌眼科剪反复剪切，剪碎至0.8-1mm³的均匀组织碎块，剪切过程避免拉扯、碾压组织。将碎块移入离心管，加入足量PBS缓冲液，轻柔吹打混匀后静置弃上清，重复漂洗4次，彻底清除组织间隙的血细胞、破碎组织，保证样本洁净。
步骤四：恒温胰酶消化解离细胞 向净化后的脑膜组织碎块中加入4mL预热37℃的0.25%胰酶消化液，完全浸没组织，置于37℃恒温水浴箱消化30min，每6min轻柔颠倒混匀一次，充分降解成纤维细胞外基质，促使细胞从脑膜组织中解离，把控消化节奏，避免细胞过度损伤失活。
步骤五：终止消化与过滤纯化 消化结束后立即加入等量成纤维细胞完全培养基终止消化反应，轻柔吹打组织混合液，释放解离细胞。通过100目无菌细胞筛过滤混合液，截留未消化的脑膜组织残片，收集纯净的成纤维细胞悬液，去除杂质与大块组织，保证细胞纯度。
步骤六：离心沉淀与细胞重悬 1000r/min室温离心10min，富集管底细胞沉淀，缓慢吸弃上层上清废液，保留完整细胞沉淀。加入2mL预热的专用培养基，轻柔、匀速吹打重悬细胞，彻底打散细胞团，形成均匀单细胞悬液，保证细胞活性与分散度。
步骤七：接种培养与日常管护 将细胞悬液接种至无菌培养瓶中，补充足量培养基，轻轻摇匀后放入37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱静置培养。24h静置贴壁，后续每日观察细胞贴壁、伸展、增殖状态，每3天更换一次新鲜培养基，去除悬浮死细胞，维持细胞正常生长代谢。
