产品名称 | 兔脑成纤维细胞 | 组织来源 | 脑组织 |
英文名称 | Rabbit Brain Fibroblasts | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3658 |
方法简介 实验室分离的兔脑成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。
质量检测 实验室分离的兔脑成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 兔脑成纤维细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔脑成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，取健康组织块约0.5-1g
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质
剪碎组织至1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶，37度消化30-40分钟
加入II型胶原酶继续消化30分钟，胎牛血清终止消化
经70um和40um滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
重悬细胞后接种于未包被培养皿中，37度培养24小时后换液去除悬浮细胞
原代培养要点
成纤维细胞贴壁能力强，接种后12-24小时大部分细胞贴壁，呈梭形或星形
使用DMEM/F12+10%FBS完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时可用0.25%胰蛋白酶消化传代
原代成纤维细胞增殖较快，通常7-14天可达融合状态
常见问题优化
成纤维细胞生长过快：适当降低FBS浓度至5-10%可减缓生长速度
细胞老化：控制传代次数在10代以内，早期代次实验结果更可靠
交叉污染：严格无菌操作，注意区分成纤维细胞与肌成纤维细胞表型
大鼠亚精胺(Spermidine)elisa试剂盒 | NCI-H810非小细胞肺癌 |
大鼠可溶性程序性死亡配体-1(sPD-L1)elisa试剂盒 | 兔输卵管上皮细胞 |
大鼠可溶程序性死亡分子-1(sPD-1)elisa试剂盒 | 兔前列腺基底细胞 |
大鼠肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)elisa试剂盒 | 大鼠食管平滑肌细胞 |
大鼠SRC;FGR;YES相关FYN癌基因(FYN)elisa试剂盒 | 人宫颈癌细胞荧光素酶标记Hela+luc(STR鉴定正确) |
大鼠S-骨胶原交联(S-CTx)elisa试剂盒 | 猪前体脂肪细胞 |
猪凝血酶抗凝血酶复合物（TAT）elisa试剂盒 | 兔原代主动脉弓内皮细胞 |
RF/6A猴脉络膜-视网膜内皮细胞专用培养基 | SEC14L5基因过表达细胞株 |
MDA-MB-361人乳腺癌细胞专用培养基 | ATG4C基因过表达细胞株 |
原代皮肤成纤维细胞（湖羊）专用培养基 | RSPH6A基因过表达细胞株 |
兔原代肠神经胶质细胞专用培养基 | GABRA2基因过表达细胞株 |
人原代胰腺成纤维细胞专用培养基 | ARID3B基因过表达细胞株 |
兔脑成纤维细胞RAW264.7+GFP细胞专用培养基 | TTLL10基因过表达细胞株 |
小鼠原代骨骼肌成纤维细胞专用培养基 | ACCSL基因过表达细胞株 |
冻存细胞复苏：取出冻存管，37℃水浴快速融化冻存细胞，轻晃冻存管，留有微小冰晶，酒精消毒外壁，超净台转移细胞悬液至预热完全培养基离心管。
离心去除冻存保护试剂：配平离心管，1000rpm 离心 5min，小心吸弃上清液，留存管底细胞沉淀。
重悬制备细胞悬液：加入 2‑3mL 兔脑成纤维细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀，打散细胞团块，形成单细胞悬液。
计数接种铺瓶：细胞计数，接种密度 5×10⁴‑1×10⁵cells/cm²，补加足量完全培养基，十字摇晃培养瓶使细胞均匀分布。
培养箱静置孵育：放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，24h 内尽量不移动培养瓶。
换液清除悬浮死细胞：复苏 24h 显微镜观察贴壁状态，弃旧培养基，更换新鲜预热完全培养基，每 2‑3 天换液。
细胞传代处理：细胞汇合 80%‑85%，PBS 清洗细胞层，胰酶消化，镜下细胞收缩变圆，加入完全培养基终止消化，收集细胞悬液离心，分瓶传代扩增。
