兔脉络膜微血管内皮细胞

兔脉络膜微血管内皮细胞

采用胶原酶 II 消化法从新西兰大白兔的脉络膜微血管内皮细胞来源血管组织中分离内皮细胞，经预纯化（低贴壁培养去除成纤维细胞）后，接种于胶原 I 包被的培养皿中，使用 EGM-2 内皮专用培养基（含 VEGF、bFGF、EGF 及肝素）培养；通过免疫荧光染色检测 CD31（PECAM-1）、VE-cadherin、vWF 及 CD34 等内皮标志物，结合 Dil-acLDL 摄取实验和 CD31/VE-cadherin 双标免疫荧光确认内皮细胞身份与纯度。

产品名称：兔脉络膜微血管内皮细胞

英文名称： Rabbit Choroidal Microvascular Endothelial Cells

组织来源： 脉络膜组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔脉络膜微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔脉络膜微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 兔脉络膜微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔脉络膜微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

冻存细胞复苏：取出冻存管，37℃水浴快速融化，轻摇冻存管，留存微小冰晶，酒精消毒外壁，超净台转移细胞悬液至微血管内皮专用预热完全培养基离心管。

离心去除冻存保护剂：配平离心管，1000rpm 离心 5min，轻柔吸弃上清，微血管内皮细胞脆弱，枪头远离细胞沉淀。

温和重悬细胞沉淀：加入 2‑3mL 兔脉络膜微血管内皮细胞完全培养基，缓慢轻柔吹打沉淀，打散细胞团，减少机械损伤。

计数接种铺板：细胞计数，接种密度 7×10⁴‑1.3×10⁵cells/cm²，补全内皮完全培养基，十字晃动培养瓶，均匀铺布细胞。

培养箱静置孵育：放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，48h 内尽量少移动，保障微血管内皮细胞贴壁。

换液观察细胞状态：复苏 24‑48h 镜检贴壁，弃旧培养基，更换新鲜预热完全培养基，每 2‑3 天换液，观察内皮细胞鹅卵石形态。

传代扩增：细胞汇合 80%‑85%，PBS 洗涤，低浓度胰酶短时间消化，镜下细胞变圆回缩立即终止消化，收集细胞悬液离心，分瓶传代，避免多次传代造成细胞表型改变。

1.组织取材后迅速置于含抗生素的PBS中清洗，去除血液和结缔组织外膜后剪碎备用。

2.使用未包被的常规培养瓶即可，成纤维细胞贴壁能力强，一般在24小时内即可见细胞从组织块边缘迁出。

3.该细胞增殖迅速，原代培养2-3周可获得足够细胞，传代后可维持培养15-20代左右。

4.使用DMEM高糖培养基加10%FBS和1%双抗，成纤维细胞在此条件下增殖旺盛形态均匀。

5.换液时用PBS洗涤可减少培养基中积累的代谢废物，有利于维持细胞健康状态。