产品名称 | 兔卵巢上皮细胞 | 组织来源 | 卵巢组织 |
英文名称 | Rabbit Ovarian Epithelial Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3674 |
方法简介 实验室分离的兔卵巢上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔卵巢上皮细胞经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔卵巢上皮细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、Hydrocortisone、肾上腺素、甲状腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔卵巢上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，组织取材量充足，活力>85%
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质，剪碎至1mm3大小
加入0.25%胰蛋白酶和II型胶原酶混合消化液，37度消化30-40分钟，期间振荡2-3次
消化完成后加入含20%胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液器反复吹打分散
依次过70um、40um细胞滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
用完全培养基重悬细胞，计数并检测活力，调整细胞密度后进行接种
原代培养要点
调整细胞密度至5x10^4-1x10^5 cells/cm2接种于胶原包被培养皿，37度、5% CO2培养
上皮细胞贴壁较慢，通常需24-48小时方可观察到贴壁细胞，建议48小时首次换液
培养基每2-3天更换一次，使用含10% FBS的DMEM/F12完全培养基
细胞融合达80-90%时可进行传代，建议采用温和的胰蛋白酶-EDTA(0.05%)消化传代
常见问题优化
细胞贴壁率低：使用多聚赖氨酸或胶原预包被培养皿表面，可显著提高贴壁效率
上皮细胞生长缓慢：培养基中添加0.1mM IBMX和5ug/mL胰岛素，可促进上皮细胞增殖
交叉污染：严格无菌操作，培养基中添加双抗(100U/mL青霉素+100ug/mL链霉素)
大鼠鞘氨醇激酶-2(Sphk-2)elisa试剂盒 | NCI-H441非小细胞肺癌 |
大鼠精胺(Spermine)elisa试剂盒 | 兔甲状旁腺细胞 |
大鼠可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1;sCD31)elisa试剂盒 | 兔输尿管平滑肌细胞 |
大鼠可溶性血小板衍生生长因子受体α(sPDGFRα)elisa试剂盒 | 兔血管外膜成纤维细胞 |
大鼠Smad同源物4(Smad4)elisa试剂盒 | 小鼠睾丸上皮细胞15P-1 (种属鉴定) |
大鼠SMURF1(SMURF1)elisa试剂盒 | 兔NK细胞 |
猪凝血因子Ⅸ（FⅨ）elisa试剂盒 | 兔原代结肠神经元细胞 |
MA-104恒河猴肾细胞专用培养基 | CCNT1基因过表达细胞株 |
MDA-MB-231+GFP人乳腺癌X+GFP细胞专用培养基 | DAO基因过表达细胞株 |
大鼠原代肠巨噬细胞专用培养基 | CREB5基因过表达细胞株 |
小鼠原代颈动脉平滑肌细胞专用培养基 | DDN基因过表达细胞株 |
人原代阴道成纤维细胞专用培养基 | ANKRD53基因过表达细胞株 |
兔卵巢上皮细胞RAG细胞专用培养基 | CIART基因过表达细胞株 |
猪原代脂肪干细胞专用培养基 | ATXN3L基因过表达细胞株 |
冻存细胞复苏：取出冻存管，37℃水浴快速融化冻存细胞，轻微晃动冻存管，少量冰晶即可，酒精消毒管壁，超净台转移细胞悬液至预热上皮细胞完全培养基离心管。
离心去除冻存试剂：配平离心管，1000rpm 离心 5min，小心吸弃上清液，保留管底细胞沉淀。
重悬分散细胞沉淀：加入 2‑3mL 兔卵巢上皮细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀，打散细胞团块，制备均匀细胞悬液。
计数接种铺瓶：细胞计数，接种密度 6×10⁴‑1.2×10⁵cells/cm²，补加足量完全培养基，十字摇晃培养瓶均匀铺布细胞。
恒温静置孵育：置于 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，24h 之内尽量不移动培养瓶。
换液监测形态：复苏 24h 显微镜观察贴壁，弃旧培养基，更换新鲜预热完全培养基，每 2‑3 天换液，观察上皮多边形形态。
传代扩增操作：细胞汇合 80%‑85%，PBS 清洗细胞层，胰酶消化，镜下细胞回缩变圆，立刻加完全培养基终止消化，收集细胞离心，分瓶传代。
