兔卵巢颗粒细胞

兔卵巢颗粒细胞

采用组织块贴壁法从新西兰大白兔的卵巢颗粒细胞来源组织中分离目标细胞，经胶原酶 II 和 Dispase 联合消化后，通过密度梯度离心纯化目标细胞组分，接种于特异性包被（如胶原 I/明胶/多聚赖氨酸）的培养表面，使用组织特异性培养基（含 10% FBS 及针对性生长因子）培养；通过免疫荧光染色检测细胞类型特异性标志物表达，结合倒置显微镜形态学观察和分子生物学方法（RT-qPCR/Western blot）验证细胞身份与功能特性。

产品名称：兔卵巢颗粒细胞

英文名称： Rabbit Ovarian Granulosa Cells

组织来源： 卵巢组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔卵巢颗粒细胞采用先机械分离，而后胶原酶消化，最后差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的兔卵巢颗粒细胞经FSHR免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）

培养基： 兔卵巢颗粒细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔卵巢颗粒细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏解冻：取出冻存管，37℃水浴快速融化，轻晃冻存管，残留少量冰晶，酒精消毒管壁，超净台中将细胞悬液转移至颗粒细胞专用预热完全培养基离心管。

离心去除冻存保护剂：配平离心管，1000rpm 离心 5min，缓慢吸弃上清液，颗粒细胞沉淀松散，操作轻柔，避免吸走细胞。

重悬制备细胞悬液：加入 2‑3mL 兔卵巢颗粒细胞完全培养基，柔和吹打沉淀，打散细胞团，降低机械剪切损伤。

计数细胞接种：细胞计数，接种密度 6×10⁴‑1.2×10⁵cells/cm²，补足培养基，十字摇晃培养瓶，均匀铺布细胞。

培养箱静置孵育：放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，24h 不挪动培养容器，利于颗粒细胞贴壁。

换液观察细胞状态：复苏 24h 镜检贴壁情况，弃旧培养基，更换新鲜预热完全培养基，每 2‑3 天换液，观察细胞形态变化。

传代扩增：细胞汇合 80% 左右，PBS 洗涤细胞，胰酶短暂消化，镜下细胞回缩变圆马上终止消化，收集细胞悬液离心，分瓶传代；该细胞传代次数不宜过高。

1.取材时需迅速分离目标血管组织，用含肝素的PBS冲洗管腔去除残留血液，整个过程控制在15分钟以内。

2.培养板需提前用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，未包被表面内皮细胞贴壁效率极低且形态不规则。

3.内皮细胞体外具有增殖能力，传代比例建议1:3至1:4，细胞融合达80-90%时需及时传代避免接触抑制。

4.培养基中需添加10ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和10ug/ml肝素，促进内皮细胞增殖并维持表型。

5.换液前预先检查培养基pH和颜色，若培养基过早变黄提示需缩短换液间隔至24小时。