兔卵巢成纤维细胞

兔卵巢成纤维细胞

从新西兰大白兔卵巢成纤维细胞组织标本经机械分离与胶原酶 II 联合消化获取成纤维细胞，经差速贴壁法纯化后接种于纤维连接蛋白包被培养皿中，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、2 mM L-谷氨酰胺及 1% 非必需氨基酸）维持培养；通过免疫荧光检测 FSP-1/S100A4、α-SMA（活化型）及 PDGFR-β 表达，Western blot 分析细胞外基质蛋白（胶原 I、纤连蛋白）分泌水平，确认成纤维细胞功能表型。

产品名称：兔卵巢成纤维细胞

英文名称： Rabbit Ovarian Fibroblasts

组织来源： 卵巢组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔卵巢成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的兔卵巢成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  兔卵巢成纤维细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔卵巢成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

冻存细胞复苏：取出冻存管，37℃水浴快速融化，轻微摇晃冻存管，冰晶基本消融，酒精消毒外壁，超净台转移细胞悬液至预温完全培养基离心管。

离心去除冻存液：配平离心管，1000rpm 离心 5min，小心吸弃上清，留存底部细胞沉淀。

重悬分散细胞沉淀：加入 2‑3mL 兔卵巢成纤维细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀，打散细胞团块，制备单细胞悬液。

计数接种培养器皿：细胞计数，接种密度 5×10⁴‑1×10⁵cells/cm²，补全培养基，十字摇晃培养瓶，使细胞均匀铺底。

恒温孵育贴壁：置于 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，24h 减少挪动培养瓶。

换液清除死细胞：复苏 24h 显微镜观察贴壁状态，弃旧培养基，更换新鲜预热完全培养基，每 2‑3 天换液。

细胞传代处理：细胞汇合 80%‑85%，PBS 清洗细胞层，胰酶消化，镜下细胞收缩变圆，加入完全培养基终止消化，收集细胞离心，分瓶传代。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.培养基中需添加20ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)以维持细胞增殖活性。

5.实验选用新西兰白兔或日本大耳兔，需注意兔源细胞的种属特异性差异。 该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。