兔淋巴管内皮细胞

兔淋巴管内皮细胞

运用组织块贴壁-酶消化联合法分离新西兰大白兔淋巴管内皮细胞，经密度梯度离心纯化内皮祖细胞后接种于明胶包被培养表面，采用含有血管内皮生长因子（VEGF 20 ng/mL）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF 5 ng/mL）和肝素（5 μg/mL）的 MCDB-131 培养基培养；通过免疫荧光检测 CD31、CD146、eNOS 表达，流式细胞术分析 CD31+/CD146+ 双阳性细胞比例，并经管状结构形成实验验证内皮细胞功能特性。

产品名称：兔淋巴管内皮细胞

英文名称： Rabbit Lymphatic Endothelial Cells

组织来源： 淋巴管

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔淋巴管内皮细胞采用中性蛋白酶消化法结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔淋巴管内皮细胞经VEGFR3免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 兔淋巴管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔淋巴管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

冻存细胞复苏：取出冻存管，37℃水浴快速融化冻存细胞，轻摇冻存管，少量冰晶留存，酒精消毒管壁，超净台将细胞悬液转移至内皮细胞专用预热完全培养基离心管。

离心去除冻存保护剂：配平离心管，1000rpm 离心 5min，轻柔吸弃上清液，内皮细胞沉淀较松散，枪头远离沉淀。

温和重悬细胞沉淀：加入 2‑3mL 兔淋巴管内皮细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀，打散细胞团，避免暴力吹打损伤内皮细胞膜。

计数接种铺板：细胞计数，接种密度 6×10⁴‑1.2×10⁵cells/cm²，补加内皮完全培养基，十字晃动培养瓶，均匀铺布细胞。

培养箱静置孵育：放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，24h 尽量不移动，便于内皮细胞贴壁。

换液监测细胞形态：复苏 24h 镜检贴壁，弃旧培养基，更换新鲜预热内皮完全培养基，每 2‑3 天换液，观察内皮鹅卵石样形态。

传代扩增培养：细胞汇合 80%‑85%，PBS 洗涤，低浓度胰酶短时间消化，镜下细胞回缩变圆立刻终止消化，收集细胞悬液离心，分瓶传代扩增。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.该细胞类型体外培养寿命有限，原代细胞通常在5-10代内出现衰老现象。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。