兔晶状体上皮细胞

兔晶状体上皮细胞

利用胶原酶 IV 和透明质酸酶联合消化法从新西兰大白兔靶组织中分离晶状体上皮细胞，经 Percoll 梯度离心去除杂细胞后，接种于纤连蛋白包被的培养表面，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、EGF 5 ng/mL 及胰岛素）进行体外扩增；通过流式细胞术检测上皮特异性抗原（ESA）、CD326 表达率，免疫细胞化学染色显示细胞骨架波形蛋白（Vimentin）阴性、细胞角蛋白阳性，并经功能实验验证其屏障功能完整性。

产品名称：兔晶状体上皮细胞

英文名称： Rabbit Lens Epithelial Cells

组织来源： 晶状体组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔晶状体上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔晶状体上皮细胞经CK18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 兔晶状体上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔晶状体上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

一、实验前准备

1. 眼科显微器械、培养皿、离心管灭菌；操作台紫外消毒。

2. 试剂：无菌 PBS、0.25% 胰酶、DMEM 完全培养基。

3. 家兔麻醉处死用品，眼球摘取后全程冰上操作。

二、取材与预处理

1. 处死家兔，摘取双侧眼球，酒精消毒眼球外壁，PBS 冲洗。

2. 显微镜下剪开眼球囊膜，完整取出晶状体，剥离晶状体囊袋组织。

三、细胞分离与消化

1. 晶状体囊膜剪碎，浸入胰酶 37℃消化 15min。

2. 培养基中和胰酶，吹打使上皮细胞从囊膜脱落。

3. 离心收集细胞，PBS 洗涤沉淀。

四、纯化与接种培养

1. 滤网过滤残留囊膜碎片，细胞悬液接种培养瓶。

2. 37℃培养，24h 首次换液去除漂浮死细胞。

3. 细胞生长至致密单层后，胰酶消化传代保种。

1.实验全程需在生物安全柜中操作，避免空气中的微生物污染培养体系。

2.培养板需提前用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，未包被表面内皮细胞贴壁效率极低且形态不规则。

3.内皮细胞增殖较快，培养5-7天即可达到融合，传代时注意控制胰酶消化时间不宜过长。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.换液前预先检查培养基pH和颜色，若培养基过早变黄提示需缩短换液间隔至24小时。