兔结肠平滑肌细胞

兔结肠平滑肌细胞

采用组织块贴壁法从新西兰大白兔的结肠平滑肌细胞来源组织中分离原代细胞，经胰蛋白酶消化传代后，接种于明胶包被的培养皿中，使用 DMEM/F12 培养基（含 10% FBS、1% 双抗及 10 ng/mL PDGF-BB）培养；通过免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）及 h-caldesmon 等平滑肌特异性标志物，结合细胞形态学观察（梭形、蜂房样排列）确认平滑肌细胞身份。

产品名称：兔结肠平滑肌细胞

英文名称： Rabbit Colonic Smooth Muscle Cells

组织来源： 结肠组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔结肠平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的兔结肠平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  兔结肠平滑肌细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔结肠平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

冻存细胞复苏：取出冻存管，37℃水浴快速融化冻存细胞，轻晃冻存管，留有少量冰晶，酒精消毒管壁，超净台转移细胞悬液至预温完全培养基离心管。

离心去除冻存保护剂：配平离心管，1000rpm 离心 5min，小心吸弃上清液，留存管底细胞沉淀。

重悬细胞沉淀：加入 2‑3mL 兔结肠平滑肌细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀，打散细胞团块，形成单细胞悬液。

计数接种铺瓶：细胞计数，接种密度 5×10⁴‑1×10⁵cells/cm²，补加足量完全培养基，十字摇晃培养瓶，细胞均匀分布瓶底。

恒温静置孵育：放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，24h 减少挪动，方便平滑肌细胞贴壁伸展。

换液清除悬浮死细胞：复苏 24h 镜检贴壁状态，弃旧培养基，更换新鲜预热完全培养基，每 2‑3 天开展换液。

传代扩增操作：细胞汇合 80%‑85%，PBS 洗涤细胞，胰酶消化，镜下细胞回缩变圆，加入培养基终止消化，收集细胞悬液离心，分瓶传代。

1.组织取材后迅速置于含抗生素的PBS中清洗，去除血液和结缔组织外膜后剪碎备用。

2.培养器皿无需特殊包被，成纤维细胞具有较强的自主贴壁和铺展能力，常规培养皿即可。

3.该细胞增殖迅速，原代培养2-3周可获得足够细胞，传代后可维持培养15-20代左右。

4.培养基中补充10%FBS和1%青霉素-链霉素，必要时可添加1ng/ml EGF促进细胞增殖。

5.培养期间注意观察是否有成纤维细胞过度生长压制其他细胞类型的情况，必要时使用选择性培养基。