兔角膜上皮细胞

兔角膜上皮细胞

基于组织块贴壁法从新西兰大白兔的角膜上皮细胞来源组织中获取初始细胞，经 0.25% 胰蛋白酶-EDTA 传代后，采用特异性上皮细胞培养体系（K-SFM 基础培养基 supplemented with bovine pituitary extract）维持培养；通过免疫荧光双标技术检测 E-cadherin/CK5 共表达，Western blot 分析上皮标志蛋白表达谱，并结合Transwell模型评估细胞极化和紧密连接蛋白（ZO-1、Claudin）的定位表达。

产品名称：兔角膜上皮细胞

英文名称： Rabbit Corneal Epithelial Cells

组织来源： 角膜组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔角膜上皮细胞采用混合胶原酶消化结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。

质量检测  实验室分离的兔角膜上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 兔角膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-3代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔角膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏解冻：取出冻存管，37℃水浴快速融化，轻微摇晃冻存管，冰晶基本消失，酒精消毒外壁，超净台转移细胞悬液至装有预热上皮细胞完全培养基的离心管。

离心去除冻存试剂：配平离心管，1000rpm 离心 5min，轻柔吸弃上清，保留底部细胞沉淀。

重悬分散细胞沉淀：加入 2‑3mL 兔角膜上皮细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀，打散细胞团块，制备均匀悬液。

计数细胞接种：细胞计数，接种密度 6×10⁴‑1.2×10⁵cells/cm²，补加培养基，十字摇晃培养瓶，均匀铺布细胞。

培养箱静置孵育：37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，24h 内尽量不移动，利于上皮细胞贴壁生长。

换液观察细胞形态：复苏 24h 显微镜观察贴壁，弃旧培养基，更换新鲜预热完全培养基，每 2‑3 天换液，观察上皮多边形形态。

细胞传代扩增：细胞汇合 80%‑85%，PBS 清洗细胞层，胰酶消化，镜下细胞收缩变圆，立刻加完全培养基终止消化，收集细胞离心，分瓶传代。

1.操作过程中需严格无菌操作，任何微生物污染都会导致细胞死亡或实验结果偏差。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.补充10ng/ml表皮生长因子(EGF)和20ng/ml胰岛素样生长因子(IGF-1)。

5.实验选用新西兰白兔或日本大耳兔，需注意兔源细胞的种属特异性差异。 细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。