兔角膜成纤维细胞

兔角膜成纤维细胞

从新西兰大白兔角膜成纤维细胞组织标本经机械分离与胶原酶 II 联合消化获取成纤维细胞，经差速贴壁法纯化后接种于纤维连接蛋白包被培养皿中，采用 DMEM/F12 完全培养基（含 10% FBS、2 mM L-谷氨酰胺及 1% 非必需氨基酸）维持培养；通过免疫荧光检测 FSP-1/S100A4、α-SMA（活化型）及 PDGFR-β 表达，Western blot 分析细胞外基质蛋白（胶原 I、纤连蛋白）分泌水平，确认成纤维细胞功能表型。

产品名称：兔角膜成纤维细胞

英文名称： Rabbit Corneal Fibroblasts

组织来源： 眼角膜组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔角膜成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的兔角膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  兔角膜成纤维细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔角膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞冻存复苏：取出冻存管，37℃水浴快速融化冻存细胞，轻微晃动冻存管，残留微小冰晶，酒精消毒外壁，移入超净台，转移细胞悬液至含有预热完全培养基的离心管。

离心去除冻存液：配平离心管，1000rpm 离心 5min，离心结束，缓慢吸弃上清液，保留管底细胞沉淀。

重悬细胞沉淀：加入 2‑3mL 兔角膜成纤维细胞完全培养基，轻柔反复吹打管底沉淀，打散细胞团，制备单细胞悬液。

计数接种铺瓶：细胞计数，接种密度 5×10⁴‑1×10⁵cells/cm²，补全培养基，十字摇晃培养瓶，均匀分布细胞。

恒温孵育贴壁：放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，前 24h 减少移动，利于细胞贴壁伸展。

换液清除死细胞：复苏 24h 显微镜观察贴壁情况，弃旧培养基，更换新鲜预热完全培养基，每 2‑3 天换液。

细胞传代处理：细胞汇合 80%‑85%，PBS 清洗细胞，胰酶消化，镜下细胞收缩变圆，加培养基终止消化，收集细胞离心，分瓶传代扩增。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养板需提前用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，未包被表面内皮细胞贴壁效率极低且形态不规则。

3.该细胞体外可传10-15代，建议采用低代次细胞进行实验，高代次细胞可能出现表型漂移和凝集素摄取能力下降。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.培养期间每48小时换液一次，观察细胞融合情况，融合度达90%以上时进行传代处理。