兔脊髓神经元细胞

兔脊髓神经元细胞

运用胶原酶 IV 和 Dispase 联合消化法从新西兰大白兔脊髓神经元细胞神经组织中分离神经元前体细胞，经密度梯度离心纯化后接种于 PLL 包被的培养皿中，采用含 B-27 supplement、NGF（10 ng/mL）和 bFGF（5 ng/mL）的 Neurobasal 完全培养基培养；通过免疫荧光双标检测 β-III-tubulin/Map2 共表达，免疫细胞化学染色显示突触蛋白（Synaptophysin）阳性，并经钙成像实验检测神经元电生理活性。

产品名称：兔脊髓神经元细胞

英文名称： Rabbit Spinal Cord Neurons

组织来源： 脊髓组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔脊髓神经元细胞采用胶原酶-胰酶联合消化法、神经元专用培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来。

质量检测  实验室分离的兔脊髓神经元细胞经β-Tubulin-Ⅲ免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）

培养基： 兔脊髓神经元细胞完全培养基(含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 神经元细胞样

传代比例： 不传代

传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液： 0.125%胰蛋白酶

兔脊髓神经元细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞温和复苏：取出兔脊髓神经元冻存管，37℃水浴快速轻晃融化，少量冰晶即可，酒精消毒管壁，超净台中将细胞悬液缓慢滴入预温神经元专用完全培养基离心管，神经元细胞脆弱，全程操作动作放缓。

低速离心去除冻存液：配平离心管，800rpm 离心 6min，降低离心转速，减少神经元损伤，离心结束轻柔吸弃上清，切勿扰动细胞沉淀。

温和重悬细胞沉淀：加入 2mL 兔脊髓神经元专用完全培养基，使用大口径枪头缓慢吹打 3‑6 次，仅打散沉淀，禁止剧烈吹打，避免神经元胞体破损。

计数接种包被培养板：提前用多聚‑L‑赖氨酸包被培养瓶 / 板，计数细胞，接种密度 8×10⁴‑1.5×10⁵cells/cm²，补加神经元培养基，缓慢十字晃动，严禁剧烈震荡。

培养箱静置孵育：放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置，48h 内不要挪动培养板，给予神经元充分时间贴壁、伸出突触。

半量换液维持培养：复苏 48h 之后执行半量换液，只吸出一半旧培养基，补入同等体积新鲜预热神经元完全培养基，不全部弃除旧培养液，保护神经元微环境，每 2‑3 天半量换液。

细胞状态监测维护：倒置显微镜每日观察神经元突触生长、胞体形态，该细胞不适合传代培养；若开展药物处理实验，直接使用原代培养神经元，避免胰酶消化损伤神经元。

1.操作过程需保持低温环境，室温下长时间暴露会导致细胞活力显著下降。

2.培养板需预先用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，以增强细胞贴壁能力。

3.成纤维细胞体外增殖能力强，传代比例1:3至1:5，细胞融合达80-90%时需及时传代防止过度融合。

4.培养基中需加入1%胰岛素转铁蛋白硒(ITS)补充剂和10nM地塞米松。

5.建议传代比例为1:2，每2-3天更换新鲜培养基，维持细胞最佳生长状态。