兔脊髓成纤维细胞

兔脊髓成纤维细胞

采用组织块贴壁法从新西兰大白兔的脊髓成纤维细胞来源组织中分离成纤维细胞，经 0.25% 胰蛋白酶消化传代后，接种于未包被培养皿中，使用 DMEM 低糖培养基（含 10% FBS、100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素）培养；通过免疫荧光染色检测成纤维细胞标志物 CD90（Thy-1）、CD44、vimentin 及 FSP-1 表达，结合细胞形态学观察（梭形、长突起 morphology）和碱性磷酸酶（ALP）活性检测确认细胞身份。

产品名称：兔脊髓成纤维细胞

英文名称： Rabbit Spinal Cord Fibroblasts

组织来源： 脊髓组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔脊髓成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来。

质量检测  实验室分离的兔脊髓成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  兔脊髓成纤维细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔脊髓成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏融化冻存管：取出冻存细胞，37℃水浴快速融化，轻微摇晃冻存管，仅剩余微小冰晶，酒精消毒外壁，超净台内转移细胞悬液至含有预热完全培养基的离心管。

离心去除冻存保护试剂：配平离心管，1000rpm 离心 5min，小心吸弃上清液，保留管底的细胞沉淀。

重悬分散细胞沉淀：加入 2‑3mL 兔脊髓成纤维细胞完全培养基，反复轻柔吹打沉淀，打散细胞团块，形成均匀细胞悬液。

计数接种培养器皿：细胞计数后，接种密度 5×10⁴‑1×10⁵cells/cm²，补加完全培养基，十字晃动培养瓶，使细胞均匀铺在瓶底。

恒温培养箱孵育：放置 37℃，5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，24h 内减少移动，利于细胞贴壁伸展。

换液清除悬浮死细胞：复苏 24h 显微镜观察贴壁状态，弃旧培养基，更换新鲜预热完全培养基，每 2‑3 天更换一次培养基。

细胞传代操作：细胞汇合达到 80%‑85%，PBS 清洗细胞层，胰酶消化，镜下细胞收缩变圆，加入完全培养基终止消化，收集细胞悬液离心，分瓶继续扩增培养。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.培养器皿需用0.1%明胶溶液包被30分钟以上，去除未结合明胶后使用。

3.细胞在体外培养过程中需注意维持其分化表型，避免过度传代导致表型丢失。

4.添加5ng/ml转化生长因子-beta(TGF-beta)以调节细胞表型和功能维持。

5.细胞融合度达到70-80%时传代，胰酶消化时间控制在1-2分钟避免过度消化。