产品名称 | 兔肌源性干细胞 | 组织来源 | 骨骼肌组织 |
英文名称 | Rabbit Myogenic Stem Cells | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2760 |
方法简介 实验室分离的兔肌源性干细胞采用胶原酶-中性蛋白酶-胰蛋白酶联合消化法结合密度梯度离心、差速贴壁法，最后通过肌源性干细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔肌源性干细胞经Sca-1免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 兔肌源性干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔肌源性干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，取材需严格无菌操作
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、MSC专用培养基/干细胞专用培养基、FBS、beta-巯基乙醇、L-谷氨酰胺
分离纯化步骤
从实验动物目标组织(骨髓/脂肪/脐带/牙髓等)中分离间充质成分
组织剪碎后经胶原酶消化(37度、2小时)，过滤获取单细胞悬液
采用密度梯度离心(Ficoll)纯化单个核细胞层
将细胞接种于培养皿中，间充质干细胞24-48小时贴壁，非贴壁细胞换液去除
贴壁细胞扩大培养至60-70%融合后，流式分选CD90+/CD105+/CD34-/CD45-细胞
原代培养要点
干细胞培养需使用专用培养基(含20%FBS的MSC培养基或DMEM/F12+20%FBS)
接种密度建议5x10^3-1x10^4 cells/cm2，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，间充质干细胞呈梭形贴壁生长，融合达80%时传代
干细胞具有三系分化潜能，可在诱导培养基中向成骨/成脂/成软骨方向分化
常见问题优化
干细胞增殖缓慢：添加FGF-2(10ng/mL)和EGF(10ng/mL)可促进增殖
干细胞分化潜能下降：控制传代次数在3-5代以内，避免过度扩增
细胞纯度不高：采用流式分选CD90+/CD105+双阳性标记可提高纯度
大鼠3氧代5α类固醇4脱氢酶2(SRD5A2)elisa试剂盒 | NCI-H1648非小细胞肺癌 |
大鼠酪氨酸蛋白激酶(Src64B)elisa试剂盒 | 兔腹膜间皮细胞 |
大鼠可溶性核因子κB受体活化因子配基(sRANKL)elisa试剂盒 | 兔胸主动脉平滑肌细胞 |
大鼠丝氨酸棕榈酰转移酶长链碱性亚基1(SPTLC1)elisa试剂盒 | 小鼠胰腺导管上皮细胞 |
大鼠S100钙结合蛋白A7(S100A7)elisa试剂盒 | 人卵巢癌细胞OVCA-429(STR鉴定正确) |
大鼠S100钙结合蛋白A8;A9复合物(S100A8;A9)elisa试剂盒 | 人表皮干细胞 |
猪葡萄糖6磷酸酶（G6PC）elisa试剂盒 | 兔原代破骨细胞 |
3D4/21猪肺泡巨噬细胞专用培养基 | EFCAB3基因过表达细胞株 |
MCF-10A人乳腺上皮细胞专用培养基 | GALNTL5基因过表达细胞株 |
人原代肝癌相关成纤维细胞专用培养基 | DDN基因过表达细胞株 |
大鼠原代牙周膜成纤维细胞专用培养基 | SPPL2C基因过表达细胞株 |
人原代直肠平滑肌细胞专用培养基 | GAB4基因过表达细胞株 |
兔肌源性干细胞PIEC细胞专用培养基 | CNST基因过表达细胞株 |
大鼠原代心房心肌细胞专用培养基 | CXCR6基因过表达细胞株 |
冻存管快速复苏：37℃水浴融化冻存细胞，轻微晃动冻存管，冰晶基本消融，75% 乙醇消毒管壁，移入超净台，将细胞悬液转移至预加完全培养基的离心管。
离心处理去除 DMSO：配平离心管，1000rpm 离心 5min，离心完毕，缓慢吸除全部上清，肌源性干细胞沉淀松散，枪头抬高，不要触碰管底。
重悬制备细胞悬液：加入 2‑3mL 兔肌源性干细胞完全培养基，柔和吹打沉淀，打散细胞聚团，控制吹打力度，减少干细胞机械损伤。
细胞计数与接种：计数细胞浓度，接种密度 5×10⁴‑1×10⁵cells/cm²，转移至培养瓶补全培养基，十字法摇匀细胞，保证细胞分散均匀。
培养箱静置孵育：置于 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，24h 之内尽量不移动培养容器，方便干细胞贴壁生长。
换液观察细胞形态：复苏 24h 后倒置显微镜观察贴壁状态，弃旧培养基，更换预热新鲜完全培养基，清除悬浮死亡细胞，每 2‑3 天换液，留意细胞分化迹象。
传代扩增维护细胞特性：细胞汇合 75%‑80% 开展传代，PBS 洗涤细胞，低浓度胰酶消化，细胞回缩变圆立刻加培养基终止消化，收集细胞离心，分瓶传代，避免细胞过度融合诱导分化。
