兔滑膜细胞

兔滑膜细胞

基于原代组织酶消化法从新西兰大白兔滑膜细胞组织标本获取单细胞悬液，经密度梯度离心和免疫磁珠分选（MACS）双重纯化后，接种于 Matrigel 或胶原包被的培养表面，使用优化配方的专用培养基（含 10% FBS、特定细胞因子及添加剂）培养；通过多组学鉴定策略（免疫荧光/流式/转录组）确认细胞身份，并采用功能实验验证其生物学活性。

产品名称：兔滑膜细胞

英文名称： Rabbit Synovial Cells

组织来源： 滑膜组织

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔滑膜细胞采用混合酶消化法制备而来。

质量检测  实验室分离的兔滑膜细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  兔滑膜细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔滑膜细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞复苏：取出冻存的兔滑膜细胞冻存管，快速投入 37℃水浴，轻柔摇晃 1‑2min 至管内冰晶基本融化，75% 酒精擦拭冻存管外壁消毒后移入超净台，将细胞悬液缓慢滴入含有完全培养基的 15mL 离心管中轻柔混匀。

离心去除冻存保护剂：将离心管配平放入离心机，1000rpm 离心 5min，结束后小心吸弃上层含 DMSO 的上清液，注意不要触碰底部细胞沉淀。

重悬细胞沉淀：向离心管内加入 2‑3mL 预热好的兔滑膜细胞专用完全培养基，使用移液管轻柔吹打细胞沉淀 8‑12 次，使细胞充分分散为单细胞悬液，避免产生大量气泡损伤细胞膜。

细胞接种铺板：吸取部分细胞悬液进行细胞计数，按照推荐接种密度（5×10⁴‑1×10⁵cells/cm²）接种至培养瓶 / 培养板，补加足量完全培养基，轻轻水平十字摇晃培养器皿，让细胞均匀分布于培养底面。

培养箱孵育培养：将培养瓶平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度细胞培养箱，静置孵育，前 24h 尽量不要挪动培养器皿，给细胞充足时间贴壁。

细胞换液观察：复苏培养 24h 后，显微镜观察细胞贴壁状态，吸弃旧培养基，加入新鲜预热完全培养基，去除未贴壁死亡细胞，后续每 2‑3 天执行一次换液操作。

细胞传代处理：当细胞汇合度达到 80%‑85% 时，吸走培养基，PBS 清洗 2 次，加入胰酶消化液孵育，镜下观察细胞回缩变圆后立刻加入完全培养基终止消化，吹打收集细胞悬液，离心后分瓶继续扩增培养。

1.所有试剂需提前预热至37度，冷试剂直接加入会显著降低细胞存活率。

2.使用Matrigel基质胶稀释后包被培养器皿，4度过夜后37度预热使用。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.培养基中需添加20ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)以维持细胞增殖活性。

5.细胞长至80-90%融合时进行传代，用0.25%胰蛋白酶消化后按1:3比例扩培。