产品名称 | 兔骺软骨细胞 | 组织来源 | 生长板组织 |
英文名称 | Rabbit Epiphyseal Chondrocytes | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2752 |
方法简介 实验室分离的兔骺软骨细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化并软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来。
质量检测 实验室分离的兔骺软骨细胞经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 兔骺软骨细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每3-4天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔骺软骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，取胫骨/股骨/关节软骨等组织
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、FBS、PBS
分离纯化步骤
取实验动物目标骨组织或软骨组织，仔细去除软组织包膜
骨组织：剪碎后用0.25%胰蛋白酶消化20分钟，再加入II型胶原酶消化60-90分钟
软骨组织：剪碎后直接用II型胶原酶37度振荡消化4-6小时
消化液经70um和40um滤网过滤，400g离心10分钟收集细胞
原代培养要点
成骨细胞：使用DMEM+10%FBS培养基，37度、5% CO2培养，细胞呈多角形贴壁
软骨细胞：使用DMEM/F12+10%FBS+10ng/mL TGF-beta3培养基，可悬浮或三维培养
成骨细胞培养14-21天后可检测到ALP活性和矿化结节形成
软骨细胞传代后易去分化，建议采用低传代次数(2-3代)或三维球状培养维持表型
常见问题优化
骨细胞得率低：延长胶原酶消化时间至90分钟，或采用两次消化法
软骨细胞去分化：采用高浓度悬浮培养(1x10^5 cells/mL)维持软骨表型
成骨细胞污染：采用差速贴壁法或免疫磁珠分选提高成骨细胞纯度
大鼠血清反应因子(SRF)elisa试剂盒 | MOR/CPR非小细胞肺癌 |
大鼠固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)elisa试剂盒 | 兔肝外胆管上皮细胞 |
大鼠3氧代5α类固醇4脱氢酶2(SRD5A2)elisa试剂盒 | 兔股动脉平滑肌细胞 |
大鼠酪氨酸蛋白激酶(Src64B)elisa试剂盒 | 人气管平滑肌细胞 |
大鼠S100蛋白(S-100)elisa试剂盒 | 小鼠睾丸间质细胞瘤细胞MLTC-1（种属鉴定） |
大鼠S100钙结合蛋白A10(S100A10)elisa试剂盒 | 兔膀胱基质成纤维细胞 |
猪前蛋白转化酶枯草溶菌素9（PCSK9）elisa试剂盒 | 人原代脂肪干细胞 |
LEC-1仓鼠卵巢细胞专用培养基 | NRG3基因过表达细胞株 |
LX-2人肝星形细胞专用培养基 | PTCD1基因过表达细胞株 |
大鼠原代卵泡膜细胞专用培养基 | EBF1基因过表达细胞株 |
人原代乳腺成纤维细胞专用培养基 | AHCYL2基因过表达细胞株 |
人原代主动脉平滑肌细胞专用培养基 | ACTRT1基因过表达细胞株 |
兔骺软骨细胞PC-3细胞专用培养基 | C18orf63基因过表达细胞株 |
人原代脑微血管内皮细胞专用培养基 | CPA6基因过表达细胞株 |
前期准备工作：兔骺软骨细胞完全培养基、PBS 缓冲液、软骨细胞消化液 37℃水浴复温；T25 培养瓶、离心管、移液耗材超净台紫外灭菌，培养基避免长时间开盖暴露。
培养瓶外壁消杀：取出细胞培养瓶，75% 酒精擦拭瓶身，移入超净台，缓慢吸弃瓶内旧培养基，操作轻柔，保护软骨贴壁细胞层。
PBS 洗涤步骤：加入 3‑4mL 无菌 PBS 缓冲液，缓慢倾斜晃动培养瓶，浸润全部细胞生长底面，洗去细胞碎片与残留血清，吸除全部 PBS 废液。
消化解离细胞：传代加入消化液室温孵育，镜下细胞收缩变圆，马上加入完全培养基终止消化；仅换液操作直接添加预热完全培养基。
离心重悬铺瓶：收集细胞悬液转移至无菌离心管，1000r/min 离心 5min，弃上清，新鲜完全培养基吹打沉淀，调整细胞密度接种新培养容器。
入箱孵育培养：标记细胞信息与操作日期，酒精擦拭瓶外壁，放入 37℃、5% CO₂饱和湿度细胞培养箱，水平静置摆放。
生长监测记录：24h 镜检贴壁，软骨细胞多边形；每 2‑3 天更换培养基，细胞汇合度 75‑80% 传代，观察细胞肥大分化、污染情况并记录。
