产品名称 | 兔颌骨成纤维细胞 | 组织来源 | 颌骨组织 |
英文名称 | Rabbit Jaw Fibroblasts | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3737 |
方法简介 实验室分离的兔颌骨成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来。
质量检测 实验室分离的兔颌骨成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 兔颌骨成纤维细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔颌骨成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，取健康组织块约0.5-1g
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12完全培养基、胎牛血清(FBS)
分离纯化步骤
取实验动物目标组织，用预冷无钙镁PBS反复冲洗去除血液和杂质
剪碎组织至1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶，37度消化30-40分钟
加入II型胶原酶继续消化30分钟，胎牛血清终止消化
经70um和40um滤网过滤，300g离心8分钟收集细胞沉淀
重悬细胞后接种于未包被培养皿中，37度培养24小时后换液去除悬浮细胞
原代培养要点
成纤维细胞贴壁能力强，接种后12-24小时大部分细胞贴壁，呈梭形或星形
使用DMEM/F12+10%FBS完全培养基，37度、5% CO2培养
每2-3天换液一次，细胞融合达80-90%时可用0.25%胰蛋白酶消化传代
原代成纤维细胞增殖较快，通常7-14天可达融合状态
常见问题优化
成纤维细胞生长过快：适当降低FBS浓度至5-10%可减缓生长速度
细胞老化：控制传代次数在10代以内，早期代次实验结果更可靠
交叉污染：严格无菌操作，注意区分成纤维细胞与肌成纤维细胞表型
大鼠信号识别颗粒14kDa蛋白(SRP14)elisa试剂盒 | LU99B非小细胞肺癌 |
大鼠固醇调节元件结合蛋白2(SREBPs2)elisa试剂盒 | 兔结肠粘膜上皮细胞 |
大鼠固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)elisa试剂盒 | 兔颈动脉平滑肌细胞 |
大鼠类固醇5α还原酶1(SRD5A1)elisa试剂盒 | 大鼠肺动脉成纤维细胞 |
大鼠S100A13钙结合蛋白(S100A13)elisa试剂盒 | 大鼠肺泡巨噬细胞NR8383（种属鉴定） |
大鼠S100蛋白(S-100)elisa试剂盒 | 大鼠脂肪血管基质细胞 |
猪前列腺素D2（PGD2）elisa试剂盒 | 小鼠原代心肌成纤维细胞 |
CTLA4 IG-24中国仓鼠卵巢细胞专用培养基 | FIGNL2基因过表达细胞株 |
LS513人结直肠癌细胞专用培养基 | CHRNA6基因过表达细胞株 |
人原代胆脂瘤细胞专用培养基 | ARID3B基因过表达细胞株 |
小鼠原代椎体终板软骨细胞专用培养基 | CIART基因过表达细胞株 |
人原代椎间盘纤维环细胞专用培养基 | ACVR2B基因过表达细胞株 |
兔颌骨成纤维细胞PC12未分化细胞专用培养基 | DMRT1基因过表达细胞株 |
鸡原代骨骼肌细胞专用培养基 | EFCAB3基因过表达细胞株 |
耗材试剂预处理：兔颌骨成纤维细胞完全培养基、PBS、消化液 37℃水浴复温；T25 培养瓶、离心管、枪头等耗材超净台紫外照射灭菌，检查培养基无浑浊变质。
培养瓶消毒转移：取出细胞培养瓶，75% 酒精擦拭瓶外壁，送入超净台，小心吸除瓶内旧培养基，避免刮蹭底部贴壁细胞。
PBS 洗涤处理：加入 4mL 无菌 PBS 缓冲液，轻轻晃动培养瓶，浸润全部细胞生长面，冲洗去除细胞碎片和残留血清，之后吸除全部 PBS 废液。
消化解离细胞：传代操作加入消化液，室温孵育，显微镜观察细胞收缩变圆，马上加入完全培养基终止消化；单纯换液直接添加新鲜培养基。
离心重悬铺瓶：收集细胞悬液转移离心管，1000r/min 离心 5min，丢弃上清液，加入预热完全培养基吹打细胞沉淀，调整细胞密度接种至新培养瓶。
培养箱放置孵育：写好标签标注细胞名称、操作日期，酒精擦拭瓶身，放入 37℃、5% CO₂饱和湿度细胞培养箱，水平放置。
细胞状态观察：24h 镜检贴壁，成纤维细胞呈梭形；每 2‑3 天换液，汇合度 75‑85% 进行传代，观察有无微生物污染，记录细胞生长情况。
