产品名称 | 兔海马神经元细胞 | 组织来源 | 脑海马体 |
英文名称 | Rabbit Hippocampal Neurons | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X3660 |
方法简介 实验室分离的兔海马神经元细胞采用胰蛋白酶消化法、神经元专用培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来。
质量检测 实验室分离的兔海马神经元细胞经β-Tubulin-Ⅲ免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 兔海马神经元细胞完全培养基(基础培养基，含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 神经元细胞样
传代比例： 不传代
传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液： 0.125%胰蛋白酶
兔海马神经元细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，需快速取材以保证神经元活力
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、Neurobasal培养基、B27添加剂、NGF、BDNF、NT-3、聚赖氨酸、脑基质胶
分离纯化步骤
取实验动物目标脑区/脊髓/神经组织，用预冷无钙镁PBS仔细冲洗
在显微镜下仔细分离目标区域，去除血管和膜组织，剪碎至1mm3
用0.25%胰蛋白酶在37度消化15-20分钟，加入DNase I辅助消化
用含FBS的DMEM终止消化，移液器轻柔吹打制成单细胞悬液
经40um滤网过滤后，300g离心5分钟收集神经元细胞
原代培养要点
将神经元细胞接种于聚赖氨酸包被的盖玻片或培养皿中，使用Neurobasal+B27培养基
接种密度建议1-2x10^5 cells/cm2，37度、5% CO2、95%湿度培养
神经元培养需添加NGF(10ng/mL)、BDNF(10ng/mL)等神经营养因子
7-14天后可观察到明显的神经元突起生长，21天后形成神经网络
常见问题优化
神经元存活率低：培养基中添加GlutaMAX和丙酮酸钠可提高神经元存活率
胶质细胞过度生长：使用Ara-C(10uM)处理可抑制胶质细胞增殖
神经元突起生长不良：添加NGF、BDNF等神经营养因子，使用脑基质胶包被基底
大鼠丝氨酸消旋酶(SRR)elisa试剂盒 | LU65C非小细胞肺癌 |
大鼠精胺合成酶(SRM)elisa试剂盒 | 兔小肠平滑肌细胞 |
大鼠固醇调节元件结合蛋白2(SREBPs2)elisa试剂盒 | 兔冠状动脉内皮细胞 |
大鼠固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)elisa试剂盒 | 鸡外周血单核细胞 |
大鼠R-脊椎蛋白1(RSPO1)elisa试剂盒 | 人肝癌细胞HepG2 (STR鉴定正确) |
大鼠S100A13钙结合蛋白(S100A13)elisa试剂盒 | 人肝外胆管上皮细胞 |
猪前列腺素F2a（PGF2a）elisa试剂盒 | 小鼠原代脑动脉平滑肌细胞 |
CHO-K1（悬浮）中国仓鼠卵巢k1 亚克隆系细胞专用培养基 | TNFAIP3基因过表达细胞株 |
LS180人结直肠癌细胞专用培养基 | ADRA2C基因过表达细胞株 |
大鼠原代单核细胞专用培养基 | EBF4基因过表达细胞株 |
大鼠原代肺微血管内皮细胞专用培养基 | CACTIN基因过表达细胞株 |
人原代子宫成纤维细胞专用培养基 | CCDC63基因过表达细胞株 |
兔海马神经元细胞PC12低分化细胞专用培养基 | CXCR6基因过表达细胞株 |
大鼠原代卵巢颗粒细胞专用培养基 | ARHGAP44基因过表达细胞株 |
试剂耗材准备：兔海马神经元专用完全培养基、PBS 置于 37℃水浴复温；多聚赖氨酸包被好的培养板 / 培养瓶、枪头、离心管超净台紫外灭菌，神经元培养基避免反复冻融。
细胞复苏处理（新细胞）：冻存细胞 37℃快速融化，75% 酒精擦拭冻存管，移入超净台，将细胞悬液缓慢滴入含有完全培养基的离心管；若是已培养细胞，直接取出培养板，酒精擦拭外壁移入超净台。
轻柔半量洗涤：神经元贴壁脆弱，不直接全量吸液，小心吸出一半旧培养基，加入等量预热 PBS，轻轻晃动，之后缓慢吸出混合废液，最大限度减少扰动神经元突触网络。
补充新鲜培养基：加入预热完成的兔海马神经元完全培养基，操作枪头贴近管壁，培养基沿侧壁缓慢流下，禁止直接冲击细胞，防止神经元脱落。
平稳转移细胞容器：盖好培养板盖子，标记细胞类型、操作时间，75% 酒精擦拭容器外壁，全程避免剧烈震荡。
培养箱静置培养：放入 37℃、5% CO₂饱和湿度细胞培养箱，水平静置，尽量减少开关培养箱频次，防止温度 CO₂波动损伤神经元。
细胞状态观察记录：24h 镜下观察神经元贴壁、突触伸展情况；每 2‑3 天进行半量换液，不要全换液；观察突触形态，排查污染，记录神经元存活状态。
