兔冠状动脉平滑肌细胞

兔冠状动脉平滑肌细胞

采用组织块贴壁法从新西兰大白兔的冠状动脉平滑肌细胞来源组织中分离原代细胞，经胰蛋白酶消化传代后，接种于明胶包被的培养皿中，使用 DMEM/F12 培养基（含 10% FBS、1% 双抗及 10 ng/mL PDGF-BB）培养；通过免疫荧光染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）及 h-caldesmon 等平滑肌特异性标志物，结合细胞形态学观察（梭形、蜂房样排列）确认平滑肌细胞身份。

产品名称：兔冠状动脉平滑肌细胞

英文名称： Rabbit Coronary Artery Smooth Muscle Cells

组织来源： 冠状动脉

默认种属 ：新西兰大白兔

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的兔冠状动脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来。

质量检测  实验室分离的兔冠状动脉平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  兔冠状动脉平滑肌细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液： 0.25%胰蛋白酶

兔冠状动脉平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

前期准备工作：兔冠状动脉平滑肌细胞完全培养基、PBS 缓冲液、消化液 37℃水浴预热；全部实验耗材超净台紫外消毒 30min，核对培养基组分，确认无絮状沉淀。

培养瓶外部消毒：取出细胞培养瓶，75% 酒精擦拭瓶外壁，送入超净台，缓慢吸除瓶内旧培养基，操作轻柔，保护平滑肌细胞贴壁层。

PBS 洗涤细胞层：加入 3‑4mL 无菌 PBS，缓慢倾斜晃动培养瓶，充分浸润整个细胞生长底面，清除残留血清以及凋亡细胞碎片，吸除 PBS 废液。

细胞消化操作：传代处理加入消化液，室温孵育，镜下看到细胞收缩变圆，细胞之间缝隙拉开，马上添加完全培养基终止消化；日常换液直接加入新鲜培养基，跳过消化步骤。

离心重悬铺瓶：收集细胞悬液转入离心管，1000r/min 离心 5min，弃掉上清，使用完全培养基轻柔吹打细胞沉淀，充分打散，调整细胞密度接种新培养瓶。

入箱培养孵育：标注细胞名称、操作日期，酒精擦拭瓶身，放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，平稳放置，减少震动干扰细胞贴壁。

生长状态监控：24h 显微镜观察贴壁，平滑肌细胞呈长梭形；每 2‑3 天更换培养基，观察细胞密度，汇合度 70‑80% 及时传代，排查细菌真菌污染并做好实验记录。

1.取材时需迅速分离目标血管组织，用含肝素的PBS冲洗管腔去除残留血液，整个过程控制在15分钟以内。

2.培养板需提前用胶原I型(50ug/ml)包被过夜，未包被表面内皮细胞贴壁效率极低且形态不规则。

3.内皮细胞体外具有增殖能力，传代比例建议1:3至1:4，细胞融合达80-90%时需及时传代避免接触抑制。

4.在基础培养基中补充20%胎牛血清、10ng/ml EGF和2ug/ml肝素钠，可维持内皮细胞表型稳定。

5.换液前预先检查培养基pH和颜色，若培养基过早变黄提示需缩短换液间隔至24小时。