产品名称 | 兔关节软骨细胞 | 组织来源 | 膝关节软骨组织 |
英文名称 | Rabbit Articular Chondrocytes | 种属 | 新西兰大白兔 |
规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | CS-X2683 |
方法简介 实验室分离的兔关节软骨细胞采用胶原酶联合中性蛋白酶消化制备而来。
质量检测 实验室分离的兔关节软骨细胞，P0代经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基： 兔关节软骨细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每3-4天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔关节软骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
前置准备
实验动物：新西兰大白兔，取胫骨/股骨/关节软骨等组织
试剂：0.25%胰蛋白酶、II型胶原酶、DNase I、DMEM/F12培养基、胎牛血清(FBS)、PBS缓冲液、DMEM/F12培养基、FBS、PBS
分离纯化步骤
取实验动物目标骨组织或软骨组织，仔细去除软组织包膜
骨组织：剪碎后用0.25%胰蛋白酶消化20分钟，再加入II型胶原酶消化60-90分钟
软骨组织：剪碎后直接用II型胶原酶37度振荡消化4-6小时
消化液经70um和40um滤网过滤，400g离心10分钟收集细胞
原代培养要点
成骨细胞：使用DMEM+10%FBS培养基，37度、5% CO2培养，细胞呈多角形贴壁
软骨细胞：使用DMEM/F12+10%FBS+10ng/mL TGF-beta3培养基，可悬浮或三维培养
成骨细胞培养14-21天后可检测到ALP活性和矿化结节形成
软骨细胞传代后易去分化，建议采用低传代次数(2-3代)或三维球状培养维持表型
常见问题优化
骨细胞得率低：延长胶原酶消化时间至90分钟，或采用两次消化法
软骨细胞去分化：采用高浓度悬浮培养(1x10^5 cells/mL)维持软骨表型
成骨细胞污染：采用差速贴壁法或免疫磁珠分选提高成骨细胞纯度
大鼠抗SSA；Ro抗体(SSA)elisa试剂盒 | LC-1/sq非小细胞肺癌 |
大鼠丝氨酸消旋酶(SRR)elisa试剂盒 | 兔大隐静脉内皮细胞 |
大鼠信号识别颗粒14kDa蛋白(SRP14)elisa试剂盒 | 兔肺成纤维细胞 |
大鼠固醇调节元件结合蛋白2(SREBPs2)elisa试剂盒 | 鸡气管上皮细胞 |
大鼠Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock-2)elisa试剂盒 | 人乳腺浸润性导管癌旁皮肤细胞CCD-1095Sk(STR鉴定正确) |
大鼠Runt相关转录因子2(RUNX2)elisa试剂盒 | 兔角膜上皮细胞 |
猪羟甲基戊二酸单酰辅酶A（HMG-CoA）elisa试剂盒 | 人原代肝纤维母细胞 |
CHO/dhFr-仓鼠卵巢,二氢叶酸还原酶缺陷细胞专用培养基 | ITPKC基因过表达细胞株 |
LS174T人结直肠腺癌细胞专用培养基 | PKD2L1基因过表达细胞株 |
人原代宫颈上皮细胞专用培养基 | GPR45基因过表达细胞株 |
人原代颈静脉球瘤细胞专用培养基 | GOLGA6L4基因过表达细胞株 |
人原代子宫内膜干细胞专用培养基 | MED25基因过表达细胞株 |
兔关节软骨细胞PATU8988S细胞专用培养基 | JPH2基因过表达细胞株 |
小鼠原代外根鞘细胞专用培养基 | NRG3基因过表达细胞株 |
一、实验前准备
1. 试剂：DMEM 高糖、10% FBS、双抗、0.2%Ⅱ 型胶原酶、透明质酸酶、PBS。
2. 器械：显微器械、培养皿、离心管，新西兰大白兔膝关节为取材部位。
3. 器械灭菌，配制好消化混合液。
二、取材与预处理
1. 白兔处死后剥离双侧后肢膝关节皮肤肌肉，暴露股骨髁与胫骨平台关节面。
2. 无菌刀片小心削取透明软骨薄层，避免切到下方骨组织，PBS 漂洗软骨片 3 次。
3. 将软骨剪切成 1mm³ 极小碎块，尽量剪细便于消化。
三、细胞分离与消化
1. 软骨碎块加入胶原酶 + 透明质酸酶混合消化液，37℃消化 4~6h。
2. 完全培养基终止消化，筛网过滤收集单细胞悬液。
3. 800rpm 离心 5min，PBS 洗涤沉淀 2 次。
四、纯化与接种培养
1. 完全培养基重悬细胞，接种培养瓶，37℃静置培养。
2. 72h 初次换液，去除漂浮死细胞，每 3 天换液；软骨细胞易老化，严控传代次数。
3. Ⅱ 型胶原蛋白免疫染色鉴定细胞类型，优先使用 P0-P1 代细胞。
